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愛必勝產(chǎn)品分類
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服務(wù)熱線

400-830-9659

  • 潮霉素B(50 mg/mL)(ABC4038)
潮霉素B(50 mg/mL)(ABC4038)
價(jià)格:714.0

產(chǎn)地:ABC

貨號(hào):ABC4038

規(guī)格:1ML

備注:潮霉素B通過干擾70S核糖體易位和誘導(dǎo)對(duì)mRNA模板的錯(cuò)讀進(jìn)而抑制蛋白質(zhì)的合成,殺死原核(細(xì)菌)、真核(例如酵母菌,真菌)和高等哺乳動(dòng)物真核細(xì)胞。

  • 潮霉素B(50 mg/mL)(ABC4038)
產(chǎn)品簡介

      潮霉素B是一種由吸水鏈霉菌代謝產(chǎn)生的氨基糖苷類抗生素。潮霉素B通過干擾70S核糖體易位和誘導(dǎo)對(duì)mRNA模板的錯(cuò)讀進(jìn)而抑制蛋白質(zhì)的合成,殺死原核(細(xì)菌)、真核(例如酵母菌,真菌)和高等哺乳動(dòng)物真核細(xì)胞。

      大腸桿菌來源的潮霉素抗性基因(hyg或hph),編碼潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶,將潮霉素B轉(zhuǎn)化成不具有生物活性的磷酸化產(chǎn)物,從而起到解毒作用。針對(duì)這一原理,潮霉素B是一種非常有用的抗性選擇標(biāo)記,可用來篩選和維持培養(yǎng)成功轉(zhuǎn)染潮霉素抗性基因的原核或真核細(xì)胞。

      本產(chǎn)品為無菌的潮霉素B溶液(50 mg/mL),可直接用培養(yǎng)液稀釋使用。常用工作濃度為200-500 μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系,建議通過建立劑量反應(yīng)曲線來確定最佳篩選濃度。

儲(chǔ)存與運(yùn)輸

      冰袋運(yùn)輸,2-8℃保存。有效期24個(gè)月。

使用說明

1. 潮霉素B劑量反應(yīng)曲線的確定:

對(duì)于初次使用的細(xì)胞,一般需要通過實(shí)驗(yàn)來確定適合自身實(shí)驗(yàn)體系的劑量反應(yīng)曲線(dose-response curve or kill curve)。

(1) 第一天:24孔板中以5~8×104 cells/孔的密度接種未轉(zhuǎn)染細(xì)胞,接種足夠量的孔以便進(jìn)行后續(xù)的劑量梯度實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)過夜。

(2) 第二天: 在培養(yǎng)過夜后的細(xì)胞中更換新鮮配制的篩選培養(yǎng)基,該篩選培養(yǎng)基為含不同濃度潮霉素B的新鮮培養(yǎng)基(如 0、50、100、250、500、750、1000 μg/mL 等),更換培養(yǎng)基后在細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。接下來每3-4天更換新的含抗生素培養(yǎng)基。

(3) 按照固定的周期進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長的合適濃度,選擇在7-10天能殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的最低濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

2. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選:

轉(zhuǎn)染含有抗性基因的質(zhì)?;蛘吒腥竞性摶虻牟《竞螅纯珊Y選穩(wěn)定表達(dá)株。

(1) 細(xì)胞轉(zhuǎn)染或感染48 h后,將細(xì)胞置于含有適當(dāng)濃度潮霉素B的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)。

注意:當(dāng)細(xì)胞處于分裂活躍期時(shí),抗生素作用最明顯。細(xì)胞過于密集,抗生素產(chǎn)生的效力會(huì)明顯下降,所以細(xì)胞的密度最好不超過 25%。建議同時(shí)做一個(gè)正常細(xì)胞的對(duì)照組。轉(zhuǎn)染或感染48 h后,如果細(xì)胞過密也可以消化后重新接種細(xì)胞,培養(yǎng)過夜后即可進(jìn)行潮霉素B篩選。

(2) 每隔3-4天,更換含有抗生素的新鮮培養(yǎng)基。

(3) 篩選7天后,對(duì)照組正常細(xì)胞應(yīng)該100%死亡,轉(zhuǎn)染組中存活的細(xì)胞為表達(dá)潮霉素B抗性基因的細(xì)胞。然后根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪M(jìn)行多克隆或單克隆細(xì)胞的篩選。

(4) 挑選出的穩(wěn)定抗性克隆繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)基維持培養(yǎng)7-10天,之后更換正常培養(yǎng)基即可。

本產(chǎn)品僅供科研用途,不用于臨床診斷!

(產(chǎn)品包裝升級(jí)中,以實(shí)物為準(zhǔn)。)

下載說明書