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: 服務(wù)熱線

400-830-9659

Annexin V-IF488/PI Cell Apoptosis Detection Kit 50T （ABC1531）

價(jià)格：1048.0

產(chǎn)地：ABC

貨號(hào)：ABC1531

規(guī)格：50T

備注：可用于凋亡早期檢測(cè)

上一個(gè)：Annexin V-IF647/PI Cell Apoptosis Detection Kit 100T （ABC1532）下一個(gè)：Annexin V-IF488/PI Cell Apoptosis Detection Kit 100T （ABC1531）

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品名稱(chēng)	產(chǎn)品編號(hào)	規(guī)格
Annexin V-IF488/PI Cell Apoptosis Detection Kit	ABC1531	50T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

細(xì)胞凋亡是發(fā)生在胚胎發(fā)育和維持組織穩(wěn)態(tài)過(guò)程中的正常生理過(guò)程，伴隨著許多形態(tài)學(xué)特征改變，其中細(xì)胞膜的丟失是細(xì)胞凋亡早期的特征之一。在正常細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸(phosphotidylserine，PS)只分布在細(xì)胞膜磷脂雙分子層的內(nèi)側(cè)，但在細(xì)胞凋亡早期，PS會(huì)從脂膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)外側(cè)，使其暴露于細(xì)胞外側(cè)。Annexin V（膜聯(lián)蛋白V）是一種Ca2+依賴(lài)的磷脂結(jié)合蛋白，對(duì)PS具有高度親和力，會(huì)與暴露PS的細(xì)胞特異性結(jié)合，因此Annexin V被作為檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡的指標(biāo)之一。碘化丙啶(Propidium Iodide，PI)是一種核酸染料，它不能透過(guò)具有完整細(xì)胞膜的正常細(xì)胞和早期凋亡細(xì)胞，但能透過(guò)凋亡晚期和壞死細(xì)胞的細(xì)胞膜并將細(xì)胞核染色。

本產(chǎn)品通過(guò)將Annexin V用IF488熒光染料分子進(jìn)行標(biāo)記后作為檢測(cè)探針，檢測(cè)細(xì)胞的早期凋亡。同時(shí)以PI區(qū)分存活的細(xì)胞與壞死、晚期凋亡細(xì)胞。Annexin V-IF488和PI結(jié)合使用，活細(xì)胞呈現(xiàn)陰性染色（Annexin V-/PI-），早期凋亡細(xì)胞呈現(xiàn)單熒光陽(yáng)性（Annexin V+/PI-），而晚期凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞呈現(xiàn)雙熒光陽(yáng)性（Annexin V+/PI+）。本試劑盒適用于流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡檢測(cè)。

儲(chǔ)存與運(yùn)輸

冰袋（wet ice）運(yùn)輸；2-8℃避光保存，12個(gè)月有效。

組成

Component Number	Component	ABC 1531-50T	ABC 1531-100T
ABC 1531-1	Annexin V-IF488	250 μL	2×250 μL
ABC 1531-2	Propidium Iodide（PI）	250 μL	2×250 μL
ABC 1531-3	1×Binding Buffer	25 mL	2×25 mL
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)		1份

操作步驟

1. 懸浮細(xì)胞：取細(xì)胞懸液，經(jīng)500 g，4℃離心5 min收集細(xì)胞；

貼壁細(xì)胞：先收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液。然后用不含EDTA的胰酶消化后，與細(xì)胞培養(yǎng)上清液合并，經(jīng)500 g，4℃離心5 min收集細(xì)胞。胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，以免過(guò)度消化引起假陽(yáng)性。

2. 用預(yù)冷的PBS清洗細(xì)胞2次，每次500 g、4℃離心5 min收集細(xì)胞；

3. 用預(yù)冷的1×Binding Buffer輕柔重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度至1~5×106/mL；

4. 取100 μL細(xì)胞懸液，加入5 μL Annexin V-IF488和5 μL PI，輕柔混勻，室溫避光8-10 min；

5. 加入400 μL預(yù)冷的1×Binding Buffer，輕輕搖勻，1 h內(nèi)用流式細(xì)胞儀或者熒光顯微鏡進(jìn)行檢測(cè)。

結(jié)果分析

1. 流式細(xì)胞儀檢測(cè)

a. 流式細(xì)胞儀檢測(cè)分析時(shí)選擇合適的電壓并調(diào)好光補(bǔ)償，除實(shí)驗(yàn)組外建議設(shè)置陰性對(duì)照（不加任何標(biāo)記物）用于調(diào)節(jié)電壓，單標(biāo)對(duì)照（只加Annexin V-IF488和只加PI）用于調(diào)節(jié)補(bǔ)償；

b. 流式細(xì)胞儀檢測(cè)分析參考實(shí)例：

用5 μM Camptothecin誘導(dǎo)Jurkat T淋巴瘤細(xì)胞6 h，參照以上實(shí)驗(yàn)步驟，用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如下圖所示。

IF488最大激發(fā)波長(zhǎng)為491 nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為518 nm；PI-DNA復(fù)合物的最大激發(fā)波長(zhǎng)為535 nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為615 nm。經(jīng)流式細(xì)胞儀相關(guān)分析軟件繪制雙色散點(diǎn)圖，IF488位于橫坐標(biāo)，PI位于縱坐標(biāo)。在典型實(shí)驗(yàn)中，活細(xì)胞無(wú)熒光，散點(diǎn)位于左下第一象限。處于早期凋亡細(xì)胞有較強(qiáng)的綠色熒光，散點(diǎn)位于右下第二象限。晚期凋亡細(xì)胞、壞死細(xì)胞呈現(xiàn)紅色、綠色雙重?zé)晒?，散點(diǎn)位于右上第三象限。

2. 熒光顯微鏡檢測(cè)

在載玻片上加6 μL Annexin V-IF488和PI雙染的細(xì)胞懸液，蓋上蓋玻片，在熒光顯微鏡下用雙色濾光片進(jìn)行觀察，Annexin V-IF488呈綠色熒光信號(hào)，PI呈紅色熒光信號(hào)。

注意事項(xiàng)

1. 整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程操作應(yīng)盡量輕柔避免細(xì)胞破碎，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

2. 用PBS清洗細(xì)胞不可省略，同時(shí)也要盡可能的去掉殘留的PBS。

3. 操作過(guò)程中如使用了胰酶，務(wù)必用血清終止消化并盡可能去除殘留胰酶。

4. 貼壁細(xì)胞凋亡刺激后，會(huì)有部分細(xì)胞飄起，同時(shí)收集細(xì)胞培養(yǎng)上清中的細(xì)胞，會(huì)使得結(jié)果更加準(zhǔn)確。

5. 細(xì)胞凋亡是一個(gè)持續(xù)動(dòng)態(tài)的過(guò)程，且熒光物質(zhì)會(huì)發(fā)生淬滅，所以反應(yīng)結(jié)束后應(yīng)盡快進(jìn)行檢測(cè)，全程也應(yīng)盡量避光操作。

6. 細(xì)胞的早期凋亡檢測(cè)建議進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)對(duì)相應(yīng)步驟進(jìn)行優(yōu)化。

7. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套，避免污染，確保安全。