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400-830-9659

Annexin V-IF647/PI Cell Apoptosis Detection Kit 50T （ABC1532）

價格：1048.0

產(chǎn)地：ABC

貨號：ABC1532

規(guī)格：50T

備注：可用于凋亡早期檢測

上一個：細胞周期與凋亡檢測試劑盒（ABC1718）下一個：Annexin V-IF647/PI Cell Apoptosis Detection Kit 100T （ABC1532）

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品編號	規(guī)格
Annexin V-IF647/PI Cell Apoptosis Detection Kit	ABC1532	50T

產(chǎn)品簡介

細胞凋亡是發(fā)生在胚胎發(fā)育和維持組織穩(wěn)態(tài)過程中的正常生理過程，伴隨著許多形態(tài)學特征改變，其中細胞膜的丟失是細胞凋亡早期的特征之一。在正常細胞中，磷脂酰絲氨酸(phosphotidylserine，PS)只分布在細胞膜磷脂雙分子層的內(nèi)側(cè)，但在細胞凋亡早期，PS會從脂膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)外側(cè)，使其暴露于細胞外側(cè)。Annexin V（膜聯(lián)蛋白V）是一種Ca2+依賴的磷脂結(jié)合蛋白，對PS具有高度親和力，會與暴露PS的細胞特異性結(jié)合，因此Annexin V被作為檢測細胞早期凋亡的指標之一。碘化丙啶(Propidium Iodide，PI)是一種核酸染料，它不能透過具有完整細胞膜的正常細胞和早期凋亡細胞，但能透過凋亡晚期和壞死細胞的細胞膜并將細胞核染色。

本產(chǎn)品通過將Annexin V用IF647熒光染料分子進行標記后作為檢測探針，檢測細胞的早期凋亡。同時以PI區(qū)分存活的細胞與壞死、晚期凋亡細胞。Annexin V-IF647和PI結(jié)合使用，活細胞呈現(xiàn)陰性染色（Annexin V-/PI-），早期凋亡細胞呈現(xiàn)單熒光陽性（Annexin V+/PI-），而晚期凋亡細胞和壞死細胞呈現(xiàn)雙熒光陽性（Annexin V+/PI+）。本試劑盒適用于流式細胞儀或熒光顯微鏡檢測。

儲存與運輸

冰袋（wet ice）運輸；2-8℃避光保存，12個月有效。

組成

Component Number	Component	ABC 1532-50T	ABC 1532-100T
ABC 1532-1	Annexin V-IF647	250 μL	2×250 μL
ABC 1532-2	Propidium Iodide（PI）	250 μL	2×250 μL
ABC 1532-3	1×Binding Buffer	25 mL	2×25 mL
產(chǎn)品說明書		1份

操作步驟

1. 懸浮細胞：取細胞懸液，經(jīng)500 g，4℃離心5 min收集細胞；

貼壁細胞：先收集細胞培養(yǎng)上清液。然后用不含EDTA的胰酶消化后，與細胞培養(yǎng)上清液合并，經(jīng)500 g，4℃離心5 min收集細胞。胰酶消化時間不宜過長，以免過度消化引起假陽性。

2. 用預冷的PBS清洗細胞2次，每次500 g、4℃離心5 min收集細胞；

3. 用預冷的1×Binding Buffer輕柔重懸細胞，調(diào)整細胞濃度至1~5×106/mL；

4. 取100 μL細胞懸液，加入5 μL Annexin V-IF647和5 μL PI，輕柔混勻，室溫避光8-10 min；

5. 加入400 μL預冷的1×Binding Buffer，輕輕搖勻，1 h內(nèi)用流式細胞儀或者熒光顯微鏡進行檢測。

結(jié)果分析

1. 流式細胞儀檢測

a. 流式細胞儀檢測分析時選擇合適的電壓并調(diào)好光補償，除實驗組外建議設(shè)置陰性對照（不加任何標記物）用于調(diào)節(jié)電壓、單標對照（只加Annexin V-IF647和只加PI）用于調(diào)節(jié)補償；

b. 流式細胞儀檢測分析參考實例：

用5 μM Camptothecin誘導Jurkat T淋巴瘤細胞6 h，參照以上實驗步驟，用流式細胞儀進行檢測，結(jié)果如下圖所示。

IF647最大激發(fā)波長為656 nm，最大發(fā)射波長為670 nm；PI-DNA復合物的最大激發(fā)波長為535 nm，最大發(fā)射波長為615 nm。經(jīng)流式細胞儀相關(guān)分析軟件繪制雙色散點圖，IF647位于橫坐標，PI位于縱坐標。在典型實驗中，活細胞無熒光，散點位于左下第一象限。處于早期凋亡細胞有較強的粉紅色熒光，散點位于右下第二象限。晚期凋亡細胞、壞死細胞呈現(xiàn)粉紅色、紅色雙重熒光，散點位于右上第三象限。

2. 熒光顯微鏡檢測

在載玻片上加6 μL Annexin V-IF647和PI雙染的細胞懸液，蓋上蓋玻片，在熒光顯微鏡下用雙色濾光片進行觀察，Annexin V-IF647呈粉色熒光信號，PI呈紅色熒光信號。

注意事項

1. 整個實驗過程操作應(yīng)盡量輕柔避免細胞破碎，影響實驗結(jié)果。

2. 用PBS清洗細胞不可省略，同時也要盡可能的去掉殘留的PBS。

3. 使用胰酶消化細胞時，應(yīng)小心操作，避免人為損傷細胞，并控制消化時間。消化時間過短，細胞需用力吹打才能脫落，容易造成細胞膜的機械損傷；若消化時間過長，細胞膜同樣容易受到損傷。影響檢測結(jié)果。另外不能使用含EDTA的胰酶，EDTA會影響Annexin V與PS的結(jié)合。

4. 貼壁細胞經(jīng)凋亡刺激后，如有部分細胞漂浮，需同時收集細胞培養(yǎng)上清液及貼壁細胞合并染色，會使得結(jié)果更加準確。

5. Annexin V-IF647和PI對光敏感，操作時注意避光。反應(yīng)結(jié)束后應(yīng)盡快進行檢測。

6. 實驗過程中請穿實驗服并戴一次性手套，避免污染，確保安全。