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免疫熒光技術利用熒光分子標記的抗體對與之結合的抗原進行定位，實現(xiàn)對蛋白質、聚糖蛋白、小生物分子及非生物分子等進行亞細胞可視化觀察。在此過程中，組織中的自發(fā)熒光往往會嚴重干擾觀察。自發(fā)熒光是在免疫熒光檢測過程中產(chǎn)生的與目的信號無關的背景熒光信號的統(tǒng)稱，其產(chǎn)生的原因主要來自于組織本身的組分，例如黃素、卟啉、植物葉綠素、膠原蛋白、彈性蛋白、紅細胞、脂褐素等都會產(chǎn)生較強的自發(fā)熒光，顯著影響免疫熒光實驗的信噪比。此外組織固定中使用的福爾馬林、多聚甲醛等物質也會產(chǎn)生大量的自發(fā)熒光。

本產(chǎn)品可有效減少組織自發(fā)熒光，提高免疫熒光檢測的信噪比。其中A液有效成分為二價銅離子，可有效減少紅細胞的自發(fā)熒光，B液有效成分為蘇丹黑，能顯著降低脂褐素引起的自發(fā)熒光。

常溫避光保存，有效期12個月。

1. 免疫標記前的自發(fā)熒光淬滅：組織切片在經(jīng)過抗原修復以后，用組化筆畫圈圈出組織，然后滴加組織自發(fā)熒光淬滅劑A液覆蓋組織室溫孵育30 min，純水洗5 min。

2. 組織切片進行常規(guī)的封閉、一抗孵育、二抗孵育、DAPI復染細胞核等免疫熒光檢測步驟。

3. 免疫標記后的自發(fā)熒光淬滅：滴加組織自發(fā)熒光淬滅劑B液覆蓋組織室溫避光孵育5 min，流水沖洗3 min。

4. 封片：玻片置于PBS中晃動洗滌（可置于脫色搖床上）3次，每次5 min。切片稍甩干后封片，鏡檢。

1. 不同樣本其自發(fā)熒光原理不同，使用組織自發(fā)熒光淬滅劑的效果可能會有差異。

2. 理論上講，針對自發(fā)熒光的淬滅劑也會一定程度降低抗體的熒光強度。經(jīng)測試，本試劑對自發(fā)熒光的淬滅程度遠遠超出抗體熒光強度的降低，在二者之間有較好的平衡。

3. 加入組織自發(fā)熒光淬滅劑B液后組織會染成深藍色，但是不會影響熒光拍照。

4. 切片經(jīng)B液孵育完以后可以用水或者PBS洗滌，但不能用含吐溫的溶液洗滌，否則B液被過度洗去影響背景熒光淬滅效果。

5. 組織自發(fā)熒光淬滅劑B液每次用完后務必將瓶蓋擰緊，防止溶劑揮發(fā)。

6. 操作時請穿實驗服，并佩戴一次性手套。

左圖：脊髓組織石蠟切片做NF200；右圖：同一張切片經(jīng)本試劑處理后再做NF200。

左圖：肝組織石蠟切片做CD31；右圖：同一張切片經(jīng)本試劑處理后再做CD31。

左圖：大鼠心肌組織石蠟切片做α-SMA；右圖：同一張切片經(jīng)本試劑處理后再做α-SMA。