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      膠原酶（collagenase）是一種蛋白水解酶，常用來消化細胞外基質(zhì)蛋白。作為一種肽鏈內(nèi)切酶，膠原酶特異性識別Pro-X-Gly-Pro序列（高頻次出現(xiàn)在膠原collagen，很少出現(xiàn)在其他蛋白質(zhì)中）并切割氨基酸（X）和甘氨酸（Gly）之間的肽鍵。商業(yè)化膠原酶來源于溶組織梭菌（Clostridium histolyticum）,是一種酶粗提物，因其所含組分不同分為I型膠原酶、II型膠原酶、III型膠原酶、IV型膠原酶、V型膠原酶等，根據(jù)其組分及降解特性又不同的用途。

      I型膠原酶含有相對均量的多種酶活（包括膠原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白酶等），通常用于上皮組織、肝、肺、脂肪和腎上腺組織的原代細胞制備。

      II型膠原酶含更高的梭菌蛋白酶活性，通常用作心臟、骨、肝、胸腺、唾液腺及軟骨等組織的原代細胞制備。

      III型膠原酶含較低的次級蛋白酶水解活性，常用于乳腺組織的原代細胞制備。

      IV型膠原酶含較低的胰酶活性，通常用于制備胰島細胞及髓系細胞。

      V型膠原為部分純化型，含更高的膠原酶和酪蛋白酶活性，更低的胰酶水平，適用于制備胰島。

      本產(chǎn)品為II型膠原酶。

基本屬性

CDU定義 在37℃，pH=7.4，鈣離子存在的條件下，膠原酶水解來源于小牛跟腱的膠原蛋白五個小時，產(chǎn)生1 μmol亮氨酸的量，定義為一個酪氨酸消化單位。

儲存與運輸

      干冰（dry ice）運輸，-20℃保存。有效期24個月

使用說明

      生化試劑的用法用量主要根據(jù)客戶的實驗目的和現(xiàn)有文獻或書籍中的實驗方法來決定，以下用途僅供參考。

      1. 膠原酶儲存液的配制

      向每管100mg的膠原酶中加入100μL的含Ca2+、Mg2+的HBSS（Hank’s平衡鹽溶液，含Ca2+、Mg2+），輕輕旋渦震蕩使其充分溶解，制備成1g/ml（即1000×）的儲存液。然后用低蛋白結(jié)合性的0.22μm的濾膜過濾除菌，分裝成小份量，然后于-20℃避光凍存。

      使用前于冰上解凍，避免反復凍融。其用于組織和細胞分散的常用濃度為：0.5-2.5mg/ml，用于軟骨消化的常用濃度為1-2mg/ml，需要根據(jù)特定的實驗條件或者參考相應的文獻資料確定所需的佳工作濃度。

      2．組織的分離

      1）使用無菌手術刀或剪刀將組織切成3-4mm大小的組織塊；

      2）利用含Ca2+、Mg2+的HBSS洗滌組織塊數(shù)次；

      3）加入足量的含Ca2+、Mg2+的HBSS，使其浸沒組織塊，并加入膠原酶至需要工作濃度；

      4）于37℃孵育4-18h。消化時使用水平搖床以及用3mM的CaCl2補充消化可以提高消化效率。

      5） 已分散開的細胞可使用不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩篩得，收集備用。未*解離的組織另外添加適量的新鮮膠原酶工作液于37℃繼續(xù)孵育；

      6）利用不含膠原酶的HBSS洗滌收集的細胞數(shù)次；

      7）細胞培養(yǎng)液重懸上述細胞，利用自動細胞計數(shù)器或其他方法計算活細胞密度；

      8）于細胞培養(yǎng)皿上利用合適細胞培養(yǎng)基接種細胞。

注意事項

      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

安全信息