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      本試劑盒為高靈敏度的兩步法免疫組化試劑盒，適用于一抗來源為兔的抗體的后續(xù)顯色。試劑盒中包含辣根過氧化物酶HRP偶聯(lián)標(biāo)記的山羊抗兔IgG，本產(chǎn)品適用于兔來源的一抗，在IHC、Western blot實驗中，HRP標(biāo)記的山羊抗兔二抗與兔來源一抗（先與抗原反應(yīng)）結(jié)合后，再與DAB反應(yīng)。DAB是辣根過氧化物酶（HRP）的底物，在HRP的催化下，DAB產(chǎn)生棕色沉淀，實現(xiàn)信號放大和顯色。

儲存與運輸

      冰袋（wet ice）運輸；二抗-20℃保存，DAB稀釋液和50×DAB原液4℃保存；有效期12個月。

準(zhǔn)備工作

      1. 自備PBS（推薦ABC4220、ABC0020）、細(xì)胞核復(fù)染試劑（推薦蘇木素染液ABC1022、蘇木素分化液ABC1057、蘇木素返藍(lán)液ABC1058）、梯度酒精、二甲苯、封片劑等。

      2. 配制二抗工作液：將HRP標(biāo)記山羊抗兔二抗用PBST（pH 7.2-7.4）以1:200比例稀釋，得到二抗工作液?，F(xiàn)配現(xiàn)用，48 h內(nèi)使用。

      3. 配制DAB顯色工作液：每1 mL DAB稀釋液中加入20 μL 50×DAB原液，混勻備用。按需配制，現(xiàn)配現(xiàn)用。

操作步驟

      1. 按照常規(guī)免疫組化步驟，組織切片經(jīng)前期脫蠟、抗原修復(fù)、封閉、一抗孵育后，經(jīng)PBS洗三次，每次5 min。

      2. 二抗孵育：每張切片上滴加50-100 μL 二抗工作液完全覆蓋組織，室溫孵育30-60 min。經(jīng)PBS洗三次，每次 5min。

      3. DAB顯色：每張切片上滴加50-100 μL DAB工作液，室溫孵育數(shù)分鐘，通過顯微鏡下觀察控制顯色至預(yù)期效果，然后立即水洗終止顯色。

      4. （可選）細(xì)胞核復(fù)染：切片經(jīng)蘇木素染液染色3-5 min，自來水洗；經(jīng)蘇木素分化液快速分化3-5 s，自來水洗；自來水沖洗返藍(lán)或經(jīng)蘇木素返藍(lán)液返藍(lán)3-5 s。

      5. 封片：切片按常規(guī)步驟經(jīng)梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。

注意事項

      1. 如果免疫組化顯色時出現(xiàn)背景過深，考慮延長洗滌時間，使用適當(dāng)?shù)姆忾]液進(jìn)行封閉，滅活內(nèi)源性過氧化氫酶，縮短顯色時間，降低二抗?jié)舛鹊?。如果沒有顯色或顯色太淺，可適當(dāng)提高一抗、二抗?jié)舛?，延長顯色時間，其次檢測二抗是否被正常顯色。

      2. DAB人體有害，操作時請小心，做好防護(hù)避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。