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      HE染色，即蘇木素(Hematoxylin)和伊紅(Eosin)聯(lián)合染色，是組織學、胚胎學、病理學教學與科研中最基本、使用最廣泛的技術方法。蘇木素染液為堿性，主要使細胞核內的染色質、胞質內的核酸著藍色至藍紫色；伊紅為酸性染料，主要使細胞質和細胞外基質中的成分著紅色。HE染色可用于觀察比較正常組織與病變組織的形態(tài)結構，可初步確定或鑒別病變組織、細胞中出現(xiàn)的異常物質。

      本產品HE染液套裝中，蘇木素染液的蘇木素濃度為0.5%，伊紅染液(醇溶)的伊紅濃度為0.05%。經本產品染色的組織或細胞，細胞核呈藍色至藍紫色，細胞漿呈紅色，胞漿與胞核對比鮮明。

儲存與運輸

      常溫保存與運輸。有效期18個月。

實驗前準備

      自備蘇木素分化液（推薦ABC1057）、蘇木素返藍液（推薦ABC1058）、二甲苯、梯度乙醇、中性樹膠等。

操作步驟

      1. 樣本前處理

      (1) 對于石蠟切片：切片依次經二甲苯脫蠟10 min，更換新鮮的二甲苯脫蠟10 min，無水乙醇 5min，新鮮無水乙醇5 min，90%乙醇5 min，75%乙醇5 min，自來水洗。

      (2) 對于冰凍切片：-20℃保存的冰凍切片需靜置5-10 min恢復至室溫。如需固定，則經所需固定液室溫后自來水洗。

      2. HE染色

      (1) 蘇木素染色：上述處理好的切片，進入蘇木素染液染色3-5 min，自來水洗；

      (2) 分化：切片經蘇木素分化液2-5 s，自來水流水充分沖洗；

      (3) 返藍：蘇木素返藍液返藍2-5 s，自來水流水充分沖洗；

      (4) 伊紅染色：切片依次經85%、95%梯度乙醇脫水，各5 min。然后進入伊紅染液(醇溶)中染色5 min，經兩次無水乙醇脫水各5 min；

      (5) 透明：切片再經新鮮無水乙醇脫水5 min，二甲苯透明5 min，更換新鮮的二甲苯再透明5 min。

      (6) 封片：滴加中性樹膠進行封片。

注意事項

      1. 染色后用特定溶液將組織中過多結合的染液脫去，這個過程稱為分化作用，所用溶液稱為分化液。在HE染色中常用低濃度鹽酸作為分化液，因為酸能破壞蘇木素的醌型結構結構，使色素與組織分離而褪色。組織在經蘇木素染色后，必須經過分化去除組織中過多結合及非特異性吸附的染料，才能進行伊紅染色，確保細胞核與胞漿顯色分明。可使用ABC1057蘇木素分化液。分化過程中，根據組織切片厚度、組織類型等結合鏡下觀察適當調整分化時間。

      2. HE染色中蘇木素染色后的返藍很重要。蘇木素在酸性條件下為離子狀態(tài)，呈紅色；在堿性條件下呈藍色。組織切片經酸性分化液分化后呈紅色或粉紅色，需立即水洗終止分化，再用弱堿性溶液使蘇木素，這個過程就是返藍作用。如果沒有專用的返藍液，用溫水浸洗也能使細胞核返藍，只是所需時間略長。推薦ABC1058蘇木素返藍液。

      3. 蘇木素及伊紅染色程度可以根據染色需要進行調整染色時間。

      4. 如果保存溫度低于15℃，蘇木素染液中可能有明礬結晶析出，不影響產品質量。且可重復使用多次，每次用完后需密封保存，防止有效成分揮發(fā)。當組織或細胞著色明顯偏淺或顏色異常時請更換新的染液。

      5. 用于染色后脫水的無水乙醇純度需大于99.9%。如果乙醇含水，伊紅會褪色導致染色不均勻。

      6. 伊紅染液(醇溶)可反復使用數次，用完后注意密封保存，防止有效成分揮發(fā)。當組織著色明顯偏淺時建議更換新的染液。

      7. 操作時請穿實驗服，佩戴一次性手套。