400-830-9659
產地:ABC
貨號:ABC2070
規(guī)格:500ML
備注:可用于Western Blot(WB)、ELISA、IHC、IF等實驗中的封閉、一抗稀釋。
本產品是新一代無蛋白快速封閉液,為多種聚合物的混合液,可快速填充固相支持物表面的空隙,減少非特異性信號的干擾;整體封閉效果明顯優(yōu)于傳統的基于BSA(牛血清白蛋白)、脫脂奶粉、酪蛋白(Casein)等的封閉液;可用于Western Blot(WB)、ELISA、IHC、IF等實驗中的封閉、一抗稀釋。
快速高效:封閉時間5分鐘即可,并且和BSA、脫脂奶粉、酪蛋白等傳統封閉劑相比,特異性信號更強。
背景低:本封閉液不含血清、白蛋白等蛋白質,確保了極高的信噪比。
兼容性好:本產品兼容辣根過氧化物酶(HRP)、堿性磷酸酶(AP)和生物素標記的二抗;不含影響HRP和AP活性的防腐劑;因不含生物素,故不會干擾基于生物素的檢測。
使用便捷:本產品含TBST,可直接用于一抗的稀釋。
冰袋(wet ice)運輸;2-8℃保存,12個月有效,長期不用可-20℃保存。
1. Western Blot中膜的封閉
a) 完成轉膜后用TBST洗滌1-2分鐘 ;
b) 根據膜的大小,選取合適的容器,加入一定體積的無蛋白快速封閉液,確保封閉液能完全覆蓋膜,置于鐘擺或水平搖床上封閉5分鐘(若出現高背景見問題三,延長封閉時間);
c) 使用無蛋白快速封閉液稀釋一抗,稀釋倍數參考對應一抗使用說明書,制成一抗工作液;
d) 封閉完成后倒出無蛋白封閉液,TBST清洗10秒,加入一抗工作液進行后續(xù)孵育。
注意:一抗工作液務必完全覆蓋PVDF或NC膜表面;無蛋白快速封閉液的主要功能是封閉PVDF或NC膜上未被蛋白質結合的位點,從而降低背景,WB曝光結果條帶增多可能說明抗體本身識別了非特異性條帶,可換用其他封閉液(牛奶或BSA);
Western Blot常見問題參照表 | ||
問題 | 可能原因 | 解決方法 |
一、無信號 |
1) PVDF或NC膜上活性HRP較少 2) 一抗二抗種屬來源不匹配 3) 一抗不識別目標抗原或者效價低 4) 轉膜未成功 |
1) ECL二次孵育或延長ECL與膜的孵育時間 2) 換用超敏ECL曝光 3) 增加樣本用量 4) 提高一抗?jié)舛然驌Q用效價高的一抗,設立陽性對照確??贵w可以識別抗原 5) 確定一抗種屬來源選擇與之匹配的二抗 6) 建議帶蛋白marker電泳和轉膜確保電泳和轉膜正常進行 |
二、信號快速衰減 | 1) ECL變質 2) PVDF或NC膜上活性HRP太多 |
1)
換用新批次的ECL 2) 降低樣品用量 3) 降低一抗?jié)舛?br /> 4) 降低二抗?jié)舛? |
三、高背景 |
1) 封閉劑與相關試劑發(fā)生交叉反應 2) 洗脫不徹底 3) 曝光時間太長 4) 封閉不充分 |
1) 換用無蛋白快速封閉液 2) 適當延長洗脫時間特別是0.22 μm PVDF膜 3) 縮短曝光時間或換用靈敏度更低的ECL 4) 延長封閉時間 |
四、棕色/黃色條帶或者條帶反白(鬼帶) | 1) PVDF或NC膜上活性HRP太多,被氧化失活的部分大量積累變成可見的棕色/黃色條帶 |
1) 降低樣品用量 2) 降低一抗?jié)舛?br /> 3) 降低二抗?jié)舛? |
五、非特異性條帶 |
1) 與抗體有關,一般單抗與多抗相比非特異性條帶更少 2) 樣本降解 |
1) 選擇特異性好、效價高的抗體 2) 重新提取新鮮樣本 |
六、條帶內存在不顯影的白點 | 1) 轉膜時濾紙與膠體、膠體與膜、膜與濾紙之間存在氣泡 | 1) 轉膜時務必將濾紙與膠體、膠體與膜、膜與濾紙之間的氣泡排除干凈 |
七、條帶變形 |
1) 制膠時膠體內部存在凝膠不均一的情況 2) 電泳時溫度過高導致膠體變形 3) 轉膜時溫度過高導致膠體變形 4) 轉膜時夾子過緊導致膠體擠壓變形 |
1) 制膠保證凝膠均一性,特別是上層膠和下層膠界面處的平整度 2) 電泳時降低電壓以降低產熱或冰浴電泳 3) 轉膜時需全程冰浴 4) 轉膜時夾子不宜過緊也不宜過松,保證有一定壓力即可 |
2. ELISA實驗中基底的封閉
a) 使用抗原或抗體包被ELISA平板;
b) 每孔添加300 μL無蛋白快速封閉液,37℃孵育5分鐘;
c) 按照ELISA實驗要求,繼續(xù)進行洗滌或甩板等后續(xù)步驟。
3. IHC和IF實驗中的封閉
a) IHC和IF實驗中使用本試劑作為溶劑溶解3%(質量體積比)的BSA,相較于PBS溶解的BSA,它在各組織中擁有穩(wěn)定的封閉性能,優(yōu)異的封閉效果;對于特異性好的抗體,可直接用本試劑作為封閉劑
b) 組織切片準備好之后加入無蛋白快速封閉液或者溶有BSA的無蛋白快速封閉液,室溫靜置30分鐘(具有組織差異性);一定要完全覆蓋樣本,避免樣品干燥產生高背景
1. 沒有任何一種封閉劑能適用于所有抗原和抗體檢測系統。如出現本試劑不適合的抗體,請?zhí)鎿Q使用其他類型的封閉劑如BSA或脫脂奶粉等。
2. 使用完畢后,將剩余溶液2-8℃保存,避免污染。
3. 本試劑具有一定黏度,移液槍吸取時需慢吸慢放以確保體積的準確性。
4. 本產品推薦僅使用一次,重復使用可能導致封閉效果下降;對于特異性好、信噪比高的抗體,本封閉液可以重復使用;回收的封閉液請勿與未使用過的封閉液混合使用。
5. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并帶一次性手套操作
本產品僅供科研用途,不用于臨床診斷!
(產品包裝升級中,以實物為準。)
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