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  • 無蛋白快速封閉液500ML (ABC2070)
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無蛋白快速封閉液500ML (ABC2070)
價格:229.0

產地:ABC

貨號:ABC2070

規(guī)格:500ML

備注:可用于Western Blot(WB)、ELISA、IHC、IF等實驗中的封閉、一抗稀釋。

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產品簡介

本產品是新一代無蛋白快速封閉液,為多種聚合物的混合液,可快速填充固相支持物表面的空隙,減少非特異性信號的干擾;整體封閉效果明顯優(yōu)于傳統的基于BSA(牛血清白蛋白)、脫脂奶粉、酪蛋白(Casein)等的封閉液;可用于Western Blot(WB)、ELISA、IHC、IF等實驗中的封閉、一抗稀釋。

快速高效:封閉時間5分鐘即可,并且和BSA、脫脂奶粉、酪蛋白等傳統封閉劑相比,特異性信號更強。

背景低:本封閉液不含血清、白蛋白等蛋白質,確保了極高的信噪比。

兼容性好:本產品兼容辣根過氧化物酶(HRP)、堿性磷酸酶(AP)和生物素標記的二抗;不含影響HRP和AP活性的防腐劑;因不含生物素,故不會干擾基于生物素的檢測。

使用便捷:本產品含TBST,可直接用于一抗的稀釋。

儲存與運輸

冰袋(wet ice)運輸;2-8℃保存,12個月有效,長期不用可-20℃保存。

操作步驟

1. Western Blot中膜的封閉

a) 完成轉膜后用TBST洗滌1-2分鐘 ;

b) 根據膜的大小,選取合適的容器,加入一定體積的無蛋白快速封閉液,確保封閉液能完全覆蓋膜,置于鐘擺或水平搖床上封閉5分鐘(若出現高背景見問題三,延長封閉時間);

c) 使用無蛋白快速封閉液稀釋一抗,稀釋倍數參考對應一抗使用說明書,制成一抗工作液;

d) 封閉完成后倒出無蛋白封閉液,TBST清洗10秒,加入一抗工作液進行后續(xù)孵育。

注意:一抗工作液務必完全覆蓋PVDF或NC膜表面;無蛋白快速封閉液的主要功能是封閉PVDF或NC膜上未被蛋白質結合的位點,從而降低背景,WB曝光結果條帶增多可能說明抗體本身識別了非特異性條帶,可換用其他封閉液(牛奶或BSA);

Western Blot常見問題參照表
問題 可能原因 解決方法
一、無信號 1) PVDF或NC膜上活性HRP較少
2) 一抗二抗種屬來源不匹配
3) 一抗不識別目標抗原或者效價低
4) 轉膜未成功
1) ECL二次孵育或延長ECL與膜的孵育時間
2) 換用超敏ECL曝光
3) 增加樣本用量
4) 提高一抗?jié)舛然驌Q用效價高的一抗,設立陽性對照確??贵w可以識別抗原
5) 確定一抗種屬來源選擇與之匹配的二抗
6) 建議帶蛋白marker電泳和轉膜確保電泳和轉膜正常進行
二、信號快速衰減 1) ECL變質 2) PVDF或NC膜上活性HRP太多 1)  換用新批次的ECL
2) 降低樣品用量
3) 降低一抗?jié)舛?br /> 4) 降低二抗?jié)舛?
三、高背景 1) 封閉劑與相關試劑發(fā)生交叉反應
2) 洗脫不徹底
3) 曝光時間太長
4) 封閉不充分
1) 換用無蛋白快速封閉液
2) 適當延長洗脫時間特別是0.22 μm PVDF膜
3) 縮短曝光時間或換用靈敏度更低的ECL
4) 延長封閉時間
四、棕色/黃色條帶或者條帶反白(鬼帶) 1) PVDF或NC膜上活性HRP太多,被氧化失活的部分大量積累變成可見的棕色/黃色條帶 1) 降低樣品用量
2) 降低一抗?jié)舛?br /> 3) 降低二抗?jié)舛?
五、非特異性條帶 1) 與抗體有關,一般單抗與多抗相比非特異性條帶更少
2) 樣本降解
1) 選擇特異性好、效價高的抗體
2) 重新提取新鮮樣本
六、條帶內存在不顯影的白點 1) 轉膜時濾紙與膠體、膠體與膜、膜與濾紙之間存在氣泡 1) 轉膜時務必將濾紙與膠體、膠體與膜、膜與濾紙之間的氣泡排除干凈
七、條帶變形 1) 制膠時膠體內部存在凝膠不均一的情況
2) 電泳時溫度過高導致膠體變形
3) 轉膜時溫度過高導致膠體變形
4) 轉膜時夾子過緊導致膠體擠壓變形
1) 制膠保證凝膠均一性,特別是上層膠和下層膠界面處的平整度
2) 電泳時降低電壓以降低產熱或冰浴電泳
3) 轉膜時需全程冰浴
4) 轉膜時夾子不宜過緊也不宜過松,保證有一定壓力即可

2. ELISA實驗中基底的封閉

a) 使用抗原或抗體包被ELISA平板;

b) 每孔添加300 μL無蛋白快速封閉液,37℃孵育5分鐘;

c) 按照ELISA實驗要求,繼續(xù)進行洗滌或甩板等后續(xù)步驟。

3. IHC和IF實驗中的封閉

a) IHC和IF實驗中使用本試劑作為溶劑溶解3%(質量體積比)的BSA,相較于PBS溶解的BSA,它在各組織中擁有穩(wěn)定的封閉性能,優(yōu)異的封閉效果;對于特異性好的抗體,可直接用本試劑作為封閉劑

b) 組織切片準備好之后加入無蛋白快速封閉液或者溶有BSA的無蛋白快速封閉液,室溫靜置30分鐘(具有組織差異性);一定要完全覆蓋樣本,避免樣品干燥產生高背景

注意事項

1. 沒有任何一種封閉劑能適用于所有抗原和抗體檢測系統。如出現本試劑不適合的抗體,請?zhí)鎿Q使用其他類型的封閉劑如BSA或脫脂奶粉等。

2. 使用完畢后,將剩余溶液2-8℃保存,避免污染。

3. 本試劑具有一定黏度,移液槍吸取時需慢吸慢放以確保體積的準確性。

4. 本產品推薦僅使用一次,重復使用可能導致封閉效果下降;對于特異性好、信噪比高的抗體,本封閉液可以重復使用;回收的封閉液請勿與未使用過的封閉液混合使用。

5. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并帶一次性手套操作

本產品僅供科研用途,不用于臨床診斷!

(產品包裝升級中,以實物為準。)

下載說明書