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產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

自由基是人體生命活動(dòng)中各種生化反應(yīng)的中間代謝產(chǎn)物，能夠攻擊生物膜中多不飽和脂肪酸，引發(fā)脂質(zhì)過氧化。在脂質(zhì)過氧化過程中會(huì)形成脂質(zhì)過氧化物，其中丙二醛（MDA）是生物體過氧化產(chǎn)物中常見的一類。因此MDA水平常被用作評(píng)判細(xì)胞或組織中脂質(zhì)過氧化水平，應(yīng)用于氧化應(yīng)激、鐵死亡等研究領(lǐng)域。

本試劑盒利用MDA在高溫環(huán)境下可與硫代巴比妥酸（TBA）反應(yīng)形成一種棕紅色復(fù)合物，并可以通過吸光度或熒光強(qiáng)度檢測(cè)的原理，經(jīng)過本司研發(fā)團(tuán)隊(duì)的優(yōu)化和調(diào)試，可有效對(duì)MDA進(jìn)行定量檢測(cè)。且本試劑盒中提供抗氧化劑，可以避免樣品在檢測(cè)的過程中發(fā)生額外氧化，使檢測(cè)結(jié)果更加準(zhǔn)確。

儲(chǔ)存與運(yùn)輸

冰袋(wet ice)運(yùn)輸；抗氧化試劑-20℃避光保存；其他組分2-8℃避光保存，6個(gè)月有效。

試劑盒組成

操作步驟

1. 樣品準(zhǔn)備：

1.1. 血漿、血清樣品：可直接用于MDA檢測(cè)；

1.2. 組織樣品：使用合適的緩沖液（PBS、生理鹽水等）或IP裂解液（推薦G2038）進(jìn)行勻漿裂解，其中組織和試劑的比例為1比10即可(g:mL)；勻漿裂解后，4℃，10000 g 離心 10-15 min，取上清用于后續(xù)MDA檢測(cè)；

1.3. 細(xì)胞樣品：細(xì)胞收集后，可使用合適的緩沖液或IP裂解液重懸細(xì)胞，大約每1 X 10^7個(gè)細(xì)胞加100-200 μL 試劑，對(duì)其進(jìn)行超聲或冰上裂解；處理后，4℃，10000 g 離心 10-15 min，取上清用于后續(xù)MDA檢測(cè)；

2. 檢測(cè)準(zhǔn)備工作：

2.1. MDA探針工作液配制：將MDA檢測(cè)探針加入5mL超純水，在煮沸條件充分溶解；并再加入與超純水等體積的5 mL冰醋酸（自備）混勻，配制成MDA探針工作液（4℃可保存一個(gè)月）；

2.2. MDA檢測(cè)工作液配制：根據(jù)所測(cè)樣品數(shù)（含標(biāo)準(zhǔn)品），參考下表合理配制；

2.3. MDA標(biāo)準(zhǔn)品配制：根據(jù)需要，使用PBS或超純水將MDA標(biāo)準(zhǔn)品（200 μM）梯度稀釋（例如吸光度法可設(shè)置50/25/12.5/6.25/3.125 μmol/L；熒光強(qiáng)度法可設(shè)置10/8/6/4/2 μmol/L），與待測(cè)樣品進(jìn)行后續(xù)檢測(cè)后，用于標(biāo)準(zhǔn)曲線法數(shù)據(jù)分析；或適當(dāng)?shù)叵♂尦梢粋€(gè)已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，與待測(cè)樣品進(jìn)行后續(xù)檢測(cè)后，用于標(biāo)準(zhǔn)品換算法數(shù)據(jù)分析；

3. MDA檢測(cè)：

3.1. 根據(jù)下表將樣品和MDA檢測(cè)工作液充分混合；

3.2. 在95℃條件下，孵育40 min；

3.3. 孵育結(jié)束后，立即冰浴5 min；

3.4. 冰浴結(jié)束后，10000 g 離心10 min，取200 μL上清于透明96孔板中，使用酶標(biāo)儀檢測(cè)532 nm處吸光度；或取200 μL于黑色96孔板中，使用酶標(biāo)儀檢測(cè)熒光強(qiáng)度（Ex 532/Em 553）；建議優(yōu)先吸光度法進(jìn)行檢測(cè)，當(dāng)樣品濃度過低，例如：1 μmol/L以下，可使用熒光強(qiáng)度法進(jìn)行檢測(cè)。

4. 數(shù)據(jù)分析：

數(shù)據(jù)分析前，需計(jì)算待測(cè)組織或細(xì)胞樣品蛋白濃度?？赏ㄟ^BCA蛋白定量檢測(cè)試劑盒對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行蛋白濃度檢測(cè)。

4.1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線法：

4.1.1. 根據(jù)梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)組值-空白組值數(shù)據(jù)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：Y=a X+ b(Y為標(biāo)準(zhǔn)組值-空白組值；X為標(biāo)準(zhǔn)品MDA濃度；a為標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率；b為標(biāo)準(zhǔn)曲線截距)；

4.1.2. 血清血漿樣品MDA濃度計(jì)算：

單位樣品MDA（μmoL/L）=[（樣品組值-空白組值）-b]/a×樣品稀釋倍數(shù)

4.1.3. 組織、細(xì)胞樣品MDA濃度計(jì)算：

單位樣品MDA（μmol/gprot）=[（樣品組值-空白組值）-b]/a×樣品稀釋倍數(shù)/樣品蛋白濃度（gprot/L）

4.2. 標(biāo)準(zhǔn)品換算法：

4.2.1. 單位血清血漿樣品MDA濃度計(jì)算：

單位樣品MDA（μmol/L）=（樣品組值-空白組值）/（標(biāo)準(zhǔn)組值-空白組值）×標(biāo)準(zhǔn)品MDA濃度（μmol/L）×樣品稀釋倍數(shù)

4.2.2. 組織、細(xì)胞樣品MDA濃度計(jì)算：

單位樣品MDA（μmol/gprot）=（樣品組值-空白組值）/（標(biāo)準(zhǔn)組值-空白組值）×標(biāo)準(zhǔn)品MDA濃度（μmol/L）×樣品稀釋倍數(shù)/組織或細(xì)胞蛋白濃度（gprot/L）

注意事項(xiàng)

1. 使用前輕輕晃動(dòng)各類試劑，確保各成分均勻條件下使用。

2. 水浴加熱時(shí)，注意避免液體暴沸濺出。

3. 本試劑盒可用吸光度法和熒光強(qiáng)度法進(jìn)行MDA檢測(cè)，當(dāng)樣品濃度過低，建議使用熒光強(qiáng)度法進(jìn)行檢測(cè)；如果設(shè)備不允許的情況下，可通過提高樣品在樣品和MDA檢測(cè)工作液混合液中占比；也可以適當(dāng)延長(zhǎng)95℃孵育時(shí)間。

4. 標(biāo)準(zhǔn)品換算法分析數(shù)據(jù)時(shí)，需待測(cè)樣品和標(biāo)準(zhǔn)品濃度處于試劑盒線性檢測(cè)量程內(nèi)；標(biāo)準(zhǔn)曲線法分析數(shù)據(jù)時(shí)，確保標(biāo)準(zhǔn)曲線R²＞0.99。

5. 當(dāng)待測(cè)樣品處于溶血或其他特殊狀態(tài)情況下，建議適當(dāng)添加一組樣品組，不進(jìn)行95℃孵育處理，作為對(duì)照組，樣品數(shù)據(jù)分析時(shí)，樣品組值-對(duì)照組值（不用減去空白組值）。

6. 為了您的健康和安全，操作時(shí)請(qǐng)穿好實(shí)驗(yàn)服、戴好手套。

附錄：技術(shù)參數(shù)

本產(chǎn)品僅供科研用途，不用于臨床診斷！

（產(chǎn)品包裝升級(jí)中，以實(shí)物為準(zhǔn)。）