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Hoechst 33258分子式為C25H24N6O·3HCl，分子量為533.88，CAS編號(hào)為23491-45-4，是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料，當(dāng)與雙鏈DNA大溝結(jié)合以后熒光顯著增強(qiáng)。最大激發(fā)波長為346 nm，最大發(fā)射波長為460 nm。Hoechst 33258常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)，細(xì)胞核染色，或常規(guī)的DNA染色?？捎糜诠潭?xì)胞、組織或非固定細(xì)胞、組織的細(xì)胞核染色，染色后可用熒光顯微鏡觀察，或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。熒光顯微鏡觀察時(shí)用紫外光激發(fā)，為藍(lán)色熒光。

本產(chǎn)品為即用型溶液，濃度經(jīng)優(yōu)化可滿足各種常規(guī)染色的需要。

冰袋（wet ice）運(yùn)輸；2-8℃避光保存，有效期6個(gè)月。

1.對(duì)于固定的細(xì)胞或者組織切片：

a.對(duì)于固定的細(xì)胞或組織樣品，固定后去除固定液，使用PBS或者其他合適的緩沖液洗滌2-3次，每次3-5 min（如檢測(cè)懸浮細(xì)胞，請(qǐng)按懸浮細(xì)胞常規(guī)操作方式進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)均需添加離心等步驟）；

b.（可選步驟）如需對(duì)固定的細(xì)胞或者組織進(jìn)行免疫熒光染色等處理，則優(yōu)先進(jìn)行相關(guān)處理，處理后再進(jìn)行Hoechst 33258染色；

c.直接取適量本產(chǎn)品Hoechst 33258染液（即用型）覆蓋樣品，室溫避光孵育5 min左右；

d.去除染液，用PBS或者其他合適的緩沖液洗滌2-3次，每次3-5 min；

e.封片后或者直接置于熒光顯微鏡下觀察，激發(fā)波長為350 nm，發(fā)射波長為460 nm。

2.對(duì)于活細(xì)胞或者培養(yǎng)組織：

a.細(xì)胞培養(yǎng)物中加入適量本產(chǎn)品Hoechst 33258染液（即用型），充分覆蓋待染色的樣品；通常六孔板一個(gè)孔中需加入1 mL染色液，96孔板一個(gè)孔中需加入100 μL染色液；于37℃培養(yǎng)箱中，孵育10-20 min；

b.去除染液，用PBS或者其他合適的緩沖液洗滌2-3次，每次3-5 min；

c.直接于熒光顯微鏡下觀察，激發(fā)波長為350 nm，發(fā)射波長為460 nm。

1. 熒光染料都存在熒光淬滅的問題，建議染色后盡快完成拍照。為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片劑（推薦ABC1419）。

2. 操作時(shí)請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服，佩戴一次性手套。