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      抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acid phosphatase，TRAP）是破骨細胞的標志性酶，特異性分布于破骨細胞中。TRAP染色試劑盒即是用于顯示組織中的破骨細胞。其中基本原理在于，在含酒石酸的酸性條件下，抗酒石酸酸性磷酸酶TRAP能將萘酚AS-BI磷酸鹽水解，產(chǎn)生的萘酚AS-BI與六偶氮副品紅結(jié)合，形成非水溶性的酒紅色物質(zhì)沉積在酶活性原位，從而實現(xiàn)對抗酒石酸酸性磷酸酶的顯色和定位。

      本產(chǎn)品基本組成成分：反應(yīng)緩沖液主要成分為醋酸緩沖液及酒石酸鉀鈉，pH約5.0；副品紅溶液，含5%副品紅；亞硝酸鈉溶液主要成分為4%亞硝酸鈉；AS-BI磷酸鹽底物溶液，主要成分為20 mg/mL萘酚AS-BI磷酸鹽。經(jīng)本產(chǎn)品染色后，破骨細胞中的TRAP呈酒紅色，定位于細胞漿。按照切片上每個組織點300 μL用量，本試劑盒可以做50次以上TRAP染色。

儲存與運輸

      冰袋（wet ice）運輸；2-8℃避光保存，其中AS-BI磷酸鹽底物溶液-20℃保存，有效期12個月。

使用方法

實驗前準備

配制TRAP工作液：

      （1）取50 μL副品紅溶液（ABC1068-2）與50 μL亞硝酸鈉溶液（ABC1068-3）在潔凈離心管中混勻，得到六偶氮副品紅溶液；

      （2）向第1步的100 μL六偶氮副品紅溶液中加入100 μL AS-BI磷酸鹽底物溶液（ABC1068-4），吹吸數(shù)次充分；

      （3）吸取1.8 mL反應(yīng)緩沖液（ABC1068-1）加入到第2步的混合液中充分混勻；

      （4）第3步的混合液經(jīng)針式濾器過濾（0.45 μm水系濾膜）即得到TRAP工作液。

注意：務(wù)必按照所屬順序配制工作液。每個組織點大約需要200-300 μL工作液，根據(jù)使用量配制，現(xiàn)配現(xiàn)用，避免浪費。

石蠟切片操作步驟（供參考）

      1. 石蠟切片脫蠟至水，純水洗數(shù)分鐘。

      2. 將切片用組化筆化圈后放在（加有一定量的防止切片蒸干的純水）濕盒中，用純水37℃孵育2 h。

      3. 切片孵育完成后傾去純水，滴加過濾好的TRAP工作液覆蓋組織，置于37℃避光反應(yīng)20-30 min。

      4. （可選，自備相關(guān)試劑）復(fù)染細胞核：傾去孵育液并水洗，以蘇木素染液進行染核。

      5. 脫水，透明，以中性樹膠封片。

細胞爬片操作步驟（供參考）

      1. 細胞固定：吸除細胞培養(yǎng)液，加入4%多聚甲醛（推薦ABC1119）固定15-30 min，蒸餾水洗3次。

      2. 細胞破膜：以0.2% Triton X-100溶液覆蓋細胞進行破膜處理20-30 min，蒸餾水輕洗3遍。

      3. 孵育染色：將TRAP工作液加到細胞孔板內(nèi)覆蓋細胞，37℃避光孵育15-20 min，蒸餾水洗3次。

      4. （可選，自備相關(guān)試劑）細胞核復(fù)染：吸除孵育液并水洗，以蘇木素染液進行染核。

      5. 加入適量無水乙醇脫水，取出孔板中的蓋玻片，吹風(fēng)機吹干，倒扣在潔凈的載玻片上以中性樹膠封片。

注意事項

      1. Goldner染液C及Goldner染液D的染色程度根據(jù)染色深淺控制，膠原部分不能太紅，會影響Goldner染液D的著色。

      2. Goldner染液E染色后需注意控制分化程度，避免分化不足或過度分化。

      3. 操作時請穿實驗服，并佩戴一次性手套。