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      本產(chǎn)品Recombinant HRV 3C Protease (Human Rhinovirus 3C Protease，PreScission Protease)是在大腸桿菌中重組表達(dá)帶His標(biāo)簽（His-tag）的人鼻病毒14型3C蛋白酶(Human Rhinovirus type 14 3C Protease)，是一種常用的半胱氨酸蛋白酶，能在低溫條件下特異性地識(shí)別八肽序列L-E-V-L-F-Q-G-P (Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln-Gly-Pro)或者核心五肽序列L-F-Q-G-P (Leu-Phe-Gln-Gly-Pro)，并在Q (Gln)與G-P (Gly-Pro)氨基酸殘基之間進(jìn)行酶切。酶的特異性強(qiáng)、活性高，即使在4℃低溫條件下依然有很高的酶活性。

      應(yīng)用：常用于去除融合蛋白中MBP、GST、His或其他標(biāo)簽蛋白。蛋白酶本身帶有His標(biāo)簽可以與鎳柱結(jié)合。

      來源：人鼻病毒14型3C蛋白酶(Human Rhinovirus type 14 3C Protease)，大腸桿菌重組表達(dá)，含His標(biāo)簽。

      酶活定義：在4℃，pH 7.5條件下，16 h內(nèi)可以將100 μg底物（含有HRV 3C Protease酶切位點(diǎn)的蛋白）切割90%以上所需酶量為一個(gè)酶活單位。

      失活或抑制：100 mM ZnCl2、4 mM AEBSF、100 μM Chymostatin都會(huì)抑制HRV 3C Protease的活性。

      純度及濃度：SDS-PAGE檢測(cè)純度≥95%，2 U/μL。

      Recombinant HRV 3C Protease儲(chǔ)存液：50 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，1 mM EDTA，1 mM DTT，50% (v/v) glycerol，pH 8.0。

      10×HRV 3C Buffer：500 mM Tris-HCl，1.5 M NaCl，10 mM EDTA，10 mM DTT，pH 7.5。

儲(chǔ)存與運(yùn)輸

      冰袋（wet ice）運(yùn)輸；-20℃保存，有效期12個(gè)月。

操作步驟

      1. 蛋白酶切體系推薦：

      2. 將上述反應(yīng)體系置于4℃反應(yīng)過夜或16 h；

      3. 取酶切產(chǎn)物10 μL樣品進(jìn)行SDS-PAGE電泳檢測(cè)，可以評(píng)估酶切用量和反應(yīng)條件。

注意事項(xiàng)

      1. 酶制品使用時(shí)應(yīng)放在冰盒內(nèi)或冰浴，使用完畢后應(yīng)立即放置于-20℃保存，建議分裝保存；

      2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

酶切應(yīng)用實(shí)例

圖1：Recombinant HRV 3C Protease酶切對(duì)照底物蛋白（A+B融合蛋白，其中含有HRV 3C Protease酶切位點(diǎn)）效果圖（酶切條件30℃、pH 7.5，分別酶切0 min、10 min、20 min、30 min、1 h、2 h，依次對(duì)應(yīng)泳道Lane：1-6，酶切體系中加入底物與酶質(zhì)量比為10：1）