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      本產(chǎn)品Recombinant SUMO Protease (Small Ubiquitin-related Modifier Protease)是一種常用的半胱氨酸蛋白酶（Ubl-specific protease 1, ubiquitin-like protein-specific protease 1, Ulp1），能高度特異性識別SUMO (Small Ubiquitin-Like Modifier)蛋白的三級結(jié)構(gòu)，水解SUMO蛋白羧基端X-Gly-Gly-X (except Pro)肽段中Gly-Gly后的肽鍵，因此該蛋白酶切割融合蛋白后釋放的目的蛋白不帶多余氨基酸。SUMO Protease酶切反應最適pH為8.0，最適反應溫度為30℃。其穩(wěn)定性很好，在pH范圍6.0-10.0，溫度范圍2-30℃，離子強度范圍0-400 mM NaCl內(nèi)均有較高的酶活性。在實際操作過程中，為盡量保留目的蛋白的結(jié)構(gòu)和生物活性，建議在4℃使用Recombinant SUMO Protease酶切過夜，同時在酶切體系中加入適當濃度DTT（0.5-2 mM）也可以顯著提高酶切效率。

      應用：常用于去除融合蛋白中SUMO標簽蛋白。蛋白酶本身帶有His標簽可以與鎳柱結(jié)合。

      來源：釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)半胱氨酸蛋白酶，大腸桿菌重組表達，帶有His標簽。

      酶活定義：在30℃，pH8.0條件下，1 h內(nèi)可以將2 μg底物（含有SUMO標簽蛋白）切割85%以上所需酶量為一個酶活單位。

      失活或抑制：高于150 mM咪唑會影響Recombinant SUMO Protease的酶切效率。

      純度及濃度：SDS-PAGE檢測純度≥95%，10 U/μL。

      Recombinant TEV protease儲存液：25 mM Tris-HCl，pH 8.0，0.1% NP-40，250 mM NaCl，500 μM DTT，50% (v/v) glycerol。

      10×SUMO Buffer+Salt：500 mM Tris-HCl，pH 8.0，2% NP-40，1.5 M NaCl，10 mM DTT。

      10×SUMO Buffer - Salt：500 mM Tris-HCl，pH 8.0，2% NP-40，10 mM DTT。

儲存與運輸

      冰袋（wet ice）運輸；-20℃保存，有效期12個月。

操作步驟

      1. 蛋白酶切體系推薦：

注：對于大部分融合蛋白，SUMO Protease最適反應緩沖液中NaCl濃度為150 mM，也可以根據(jù)實際條件調(diào)整NaCl濃度（0-300 mM）

      2. 將上述反應體系置于30℃反應1、2或4 h。如果目的蛋白在30℃穩(wěn)定性不好，可以考慮將反應體系置于4℃過夜酶切（約16 h左右）；

      3. 取酶切產(chǎn)物10 μL樣品進行SDS-PAGE電泳檢測，可以評估酶切用量和反應條件。

注意事項

      1. 酶制品使用時應放在冰盒內(nèi)或冰浴，使用完畢后應立即放置于-20℃保存，建議分裝保存；

      2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

酶切應用實例

圖1：Recombinant SUMO Protease 酶切對照底物蛋白（SUMO+B融合蛋白）效果圖（酶切條件30℃、pH 8.0，分別酶切0 min、10 min、20 min、30 min、1 h、2 h、4 h，依次對應泳道Lane：1-7，酶切體系中加入底物與酶質(zhì)量比為10：1）。