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      RIPA裂解液（RIPA Lysis Buffer）是一種傳統(tǒng)的細胞及組織快速裂解液。RIPA裂解液有很多配方，按其裂解效果主要分為強，中，弱三種。RIPA弱裂解液裂解組織、細胞得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的PAGE、Western等對蛋白活性沒有嚴格要求的實驗。本產品主要成分為：50 mM Tris-HCl (pH 7.4)，150 mM NaCl，1 mM EDTA-2Na2，0.25% Sodium deoxycholate，和1% NP-40。本產品適用于動物或植物組織及細胞樣品，也可用于真菌或細菌樣品。

儲存與運輸

      冰袋（wet ice）運輸；2-8℃避光保存，有效期12個月。

使用方法

自備蛋白酶抑制劑。RIPA裂解液（弱）在臨用前需加入蛋白酶抑制劑，推薦ABC2024，ABC2025，ABC2026等，防止蛋白降解。以下使用方法中提到的RIPA裂解液(弱)均指已添加蛋白酶抑制劑。

對于組織樣品：

      1. 組織塊用預冷PBS（推薦ABC4220）洗滌，去除血污，剪成細小碎塊置于勻漿器中。

      2. 加入10倍組織體積RIPA裂解液(弱)低溫勻漿（推薦ABC自主研發(fā)生產的高速組織研磨儀）。注意，RIPA裂解液(弱)的使用量可按照約每50 mg組織與1 mL裂解液的比例添加。如組織蛋白含量較低，可降低裂解液的用量，以提高粗提溶液中的蛋白濃度。

      3. 將勻漿液轉移至1.5 mL離心管中，振蕩。冰浴30 min，期間每10 min用移液器反復吹打，確保組織細胞完全裂解。

      4. 12000 g離心5 min，收集上清，即為總蛋白溶液。

對于貼壁細胞樣品：

      1. 用PBS清洗細胞2-3次，最后一次徹底吸干殘留液。

      2. 按照6孔板每孔細胞250 μL裂解液的比例吸取RIPA裂解液(弱)于細胞培養(yǎng)板、瓶內，反復晃動培養(yǎng)板、瓶，使裂解液與細胞充分接觸3-5 min。

      3. 用細胞刮刀將細胞刮下，收集到離心管中。

      4. 冰上裂解30 min。

      5. 12000 g離心5 min，收集上清，即為總蛋白溶液。

對于懸浮細胞樣品：

      1. 離心收集細胞。

      2. 按照6孔板每孔細胞250 μL裂解液的比例將細胞液與RIPA裂解液(弱)混合，振蕩。

      3. 冰浴30 min，期間每10 min用移液器反復吹打數(shù)次，確保細胞完全裂解。

      4. 12000 g離心5 min，收集上清，即為總蛋白溶液。

對于細菌或真菌樣本：

      1．取1 mL菌懸液，離心去上清，PBS洗滌一次，充分去除液體。渦旋使菌體盡量分散。

      2．加入100-200 μL RIPA裂解液(弱)，輕輕渦旋使菌體與裂解液充分混勻。

      3．冰浴10 min，期間每2 min用移液器反復吹打數(shù)次，確保菌體完全裂解。

      4．12000 g離心5 min，收集上清，即為總蛋白溶液。

注意事項

      1. 組織或細胞裂解時可能會出現(xiàn)粘稠狀?？捎靡埔浩鞣磸痛荡蚧驕u旋儀振蕩，直至呈液狀為止。如果一直較稠，可再加入適量裂解液。

      2. 本試劑不含有蛋白酶抑制劑，需自備蛋白酶抑制劑并在臨用前加入。推薦使用本公司的ABC2024，ABC2025，ABC2026等相關蛋白酶抑制劑。

      3. 操作時請穿實驗服，并佩戴一次性手套。