400-830-9659
產(chǎn)地:ABC
貨號(hào):ABC2055
規(guī)格:50T
備注:1、可做任意濃度 2、可單獨(dú)補(bǔ)充上層膠指示染料
本產(chǎn)品SDS-PAGE凝膠快速制備試劑盒,包含凝膠制備所需的所有試劑,用戶只需準(zhǔn)備少量純水及制膠設(shè)備(制膠底座、玻璃板、梳子等),根據(jù)說(shuō)明書(shū)操作即可在短時(shí)間內(nèi)制得所需凝膠。本試劑盒可制備常規(guī)大小凝膠至少50塊。
儲(chǔ)存與運(yùn)輸
冰袋(wet ice)運(yùn)輸;改良型促凝劑-20℃保存,其他2-8℃避光保存,有效期12個(gè)月。
使用方法
1. 根據(jù)目的蛋白分子量和所選電泳緩沖液不同,選擇合適濃度的SDS-PAGE下層膠,參照表格如下:
SDS-PAGE分離膠濃度 |
最佳分離范圍(kDa) (Tris-Glycine電泳緩沖液,ABC2036) |
最佳分離范圍(kDa) (SWE快速高分辨電泳緩沖液,ABC2099) |
6% | 50-300 | 15-300 |
8% | 30-130 | 10-250 |
10% | 20-100 | 5-150 |
12% | 10-60 | 3-100 |
15% | <40 | <60 |
2. 根據(jù)目標(biāo)蛋白分子量大小,選取分離膠的濃度,以常用規(guī)格8.3 cm×7.3 cm凝膠板(單塊)為例,可參考下表配制制膠液:
分離膠濃度 | 6% | 8% | 10% | 12% | 15% | ||||||||||
玻璃板厚度(mm) | 0.75 | 1.0 | 1.5 | 0.75 | 1.0 | 1.5 | 0.75 | 1.0 | 1.5 | 0.75 | 1.0 | 1.5 | 0.75 | 1.0 | 1.5 |
所需制膠液總體積(mL)* | 4.0 | 6.0 | 8.0 | 4.0 | 6.0 | 8.0 | 4.0 | 6.0 | 8.0 | 4.0 | 6.0 | 8.0 | 4.0 | 6.0 | 8.0 |
H2O(mL) | 2.16 | 3.24 | 4.32 | 1.89 | 2.84 | 3.78 | 1.63 | 2.44 | 3.25 | 1.36 | 2.04 | 2.72 | 0.96 | 1.44 | 1.92 |
30%丙烯酰胺(29:1)(mL) | 0.8 | 1.2 | 1.6 | 1.07 | 1.6 | 2.14 | 1.33 | 2.0 | 2.67 | 1.6 | 2.4 | 3.2 | 2.0 | 3.0 | 4.0 |
4×Tris-SDS分離膠緩沖液(mL) | 1.0 | 1.5 | 2.0 | 1.0 | 1.5 | 2.0 | 1.0 | 1.5 | 2.0 | 1.0 | 1.5 | 2.0 | 1.0 | 1.5 | 2.0 |
改良型促凝劑(μL) | 40 | 60 | 80 | 40 | 60 | 80 | 40 | 60 | 80 | 40 | 60 | 80 | 40 | 60 | 80 |
TEMED(μL) | 2.0 | 3.0 | 4.0 | 2.0 | 3.0 | 4.0 | 2.0 | 3.0 | 4.0 | 2.0 | 3.0 | 4.0 | 2.0 | 3.0 | 4.0 |
*制膠液總體積不包含TEMED的體積。
3. 濃縮膠配制可參考下表:
濃縮膠濃度(%) | 5% | |||
H2O/mL | 1.75 | 2.63 | 3.5 | 5.25 |
30%丙烯酰胺(29:1)/mL | 0.5 | 0.75 | 1.0 | 1.5 |
4×Tris-SDS濃縮膠緩沖液/mL | 0.75 | 1.13 | 1.5 | 2.25 |
改良型促凝劑/μL | 18 | 27 | 36 | 54 |
TEMED/μL | 4.0 | 6.0 | 8.0 | 12.0 |
總體積*/mL | 3.0 | 4.5 | 6.0 | 9.0 |
*總體積不包含TEMED的體積。
4. 推薦電泳條件:
a. 使用SWE快速高分辨電泳緩沖液(ABC2099)進(jìn)行電泳:200-250 V恒壓,25-35 min可完成電泳;
b. 使用Tris-Glycine電泳緩沖液(ABC2036)進(jìn)行電泳:設(shè)置電壓上層膠90 V,電泳約30 min(marker進(jìn)入分離膠);下層膠調(diào)整電壓為150-180 V,約60-90 min(可根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整)。
注意事項(xiàng)
1. 所有試劑使用前需要提前復(fù)溫至室溫后方可使用。
2. 改良型促凝劑相較于過(guò)硫酸銨(AP)穩(wěn)定性更好,使用時(shí)拿出一支,使用結(jié)束后于4℃保存,以便后續(xù)常規(guī)使用,可保存六個(gè)月;若長(zhǎng)期不用請(qǐng)放置于-20℃保存,避免反復(fù)凍融。
3. 小于10 kDa的蛋白分離建議使用Tricine膠,丙烯酰胺凝膠可能不足以分離。
4. 溫度對(duì)于膠的凝固時(shí)間影響較大,為保證實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行,一般溫度越低,凝固時(shí)間越長(zhǎng),可適當(dāng)增加改良型促凝劑用量;溫度越高凝膠越快,可適當(dāng)減少改良型促凝劑用量。
5. 凝膠需要充分的凝固時(shí)間,建議膠制好充分靜置確保凝膠徹底。
6. 當(dāng)溫度較低時(shí),10%SDS溶液有結(jié)晶析出,于37℃復(fù)溫融化后可繼續(xù)使用。
7. 如需快速制膠試劑,可購(gòu)買(mǎi)本公司其他產(chǎn)品,如SDS-PAGE凝膠快速制備試劑盒(ABC2055),或超快速彩色凝膠配制試劑盒系列(ABC2059/ABC2060/ABC2061/ABC2062/ABC2063,ABC2078/ABC2079/ABC2080/ABC2081/ABC2082),及高分辨超快速彩色凝膠配制試劑盒系列(ABC2084/ABC2085/ABC2086,ABC2089/ABC2090/ABC2091),可滿足不同實(shí)驗(yàn)需求。
8. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
本產(chǎn)品僅供科研用途,不用于臨床診斷!
(產(chǎn)品包裝升級(jí)中,以實(shí)物為準(zhǔn)。)
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