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      銀染是靈敏度較高的一種染色方法，其基本原理是通過被還原陰離子在蛋白質(zhì)上形成黑色沉淀來顯示蛋白條帶。銀染的靈敏度比傳統(tǒng)的考馬斯亮藍染色法高100倍，可檢測低于0.5 ng的蛋白質(zhì)。正是由于其較高的靈敏度，銀染廣泛應(yīng)用于2D凝膠分析及極低蛋白含量測定的垂直PAGE凝膠中，是對凝膠中低豐度蛋白檢測的常用方法。本產(chǎn)品可用于SDS-PAGE或PAGE聚丙烯酰胺凝膠中的蛋白質(zhì)檢測，靈敏度高，操作方便快捷，背景幾乎無色，可在90 min內(nèi)完成1塊凝膠的銀染。本試劑盒可以染25塊同規(guī)格的凝膠。

保存條件

      室溫運輸；增敏劑常溫保存，其余試劑2-8℃保存，12個月有效期。

操作步驟

      1. 固定：按下表配制固定液。將凝膠置于潔凈的染缸中，超純水清洗三次，加入固定液20 mL覆蓋凝膠，水平搖床慢搖（60-70 rpm）孵育30 min，為防止醋酸和乙醇揮發(fā)，請使用保鮮膜將染缸密封。延長固定時間可進一步降低背景。

      2. 洗滌：倒掉固定液，更換超純水覆蓋凝膠，水平搖床快搖清洗三次，每次10 min。

      3. 增敏：按下表配制敏化工作液。加入敏化工作液覆蓋凝膠，水平搖床慢搖孵育1 min。

      4. 洗滌：倒掉敏化工作液，更換超純水，搖床快搖清洗三次，每次20 s。

      5. 銀染：按照下表配制銀染工作液。加入銀染工作液覆蓋凝膠，搖床慢搖孵育20 min；銀染工作液需現(xiàn)配現(xiàn)用，盡量在2 h內(nèi)使用。

      6. 水洗滌：棄去染液，更換超純水，搖床快搖清洗三次，每次20 s。

      7. 顯色：按下表配制顯影工作液。加入顯影工作液覆蓋凝膠，搖床慢搖孵育1-5 min，直至出現(xiàn)理想的目的蛋白條帶。

      8. 終止：按照下表配制顯影終止液。加入顯影終止液覆蓋凝膠，搖床快搖孵育2 min；過程中有氣體產(chǎn)生屬正?，F(xiàn)象，產(chǎn)生的氣體為CO₂。然后棄去終止液，以超純水清洗凝膠2-5 min。

      9. 保存：清洗后的凝膠置于即可用于觀察及拍照。染色后的凝膠可置于超純水或1%醋酸溶液中保存。或采用適當?shù)姆绞街瞥筛赡z。

注意事項

      1. 為防止雜質(zhì)的干擾，操作時需使用高純度的水（電阻值大于16 MΩ/cm）和潔凈的玻璃器皿或塑料容器，不能使用金屬容器。

      2. 全程實驗請做好防護措施，實驗中超純水、無水乙醇、冰醋酸需自備。

      3. 操作過程中請勿直接接觸或按壓膠體，且染色用的染缸不能使用金屬制品，玻璃或者塑料容器為最佳。

      4. 增敏劑室溫避光保存，請勿4℃保存，否則會失效。

      5. 所有工作液需現(xiàn)配現(xiàn)用。試劑開瓶使用后需擰緊瓶蓋，防止溶液揮發(fā)和與空氣中的物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，影響染色效果。

      6. 顯影液長時間4℃保存有晶體析出（正?，F(xiàn)象），可37℃溫育至完全溶解再行使用。

      7. 當凝膠較厚或者操作溫度較低時，可適當延長顯色時間。

      8. 每個步驟的染色時間、洗滌時間、顯色及終止的時間要控制好，否則膠背景變深，不易觀察目的條帶。