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      PEI 40K Transfection Reagent（線性化聚乙烯亞胺轉(zhuǎn)染試劑），是一種以線性化聚乙烯亞胺為主體、分子量為40000的高電荷陽離子聚合物，其本身帶正電，可以有效的結(jié)合帶負(fù)電的核酸，與之形成復(fù)合物，并導(dǎo)入到細(xì)胞中，適用于細(xì)胞的質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染。PEI 40K（線性化聚乙烯亞胺）轉(zhuǎn)染試劑細(xì)胞毒性低，轉(zhuǎn)染效率高且成本低，相較于脂質(zhì)體類轉(zhuǎn)染試劑，性價(jià)比極高。目前已經(jīng)驗(yàn)證線性PEI 40K轉(zhuǎn)染試劑廣泛適用于多種細(xì)胞系包括HEK-293、HEK293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2和Hela細(xì)胞等，轉(zhuǎn)染效率高達(dá)80%~90%。本產(chǎn)品主要成分PEI 40K濃度為1 mg/mL。

儲(chǔ)存與運(yùn)輸

      冰袋（wet ice）運(yùn)輸；-20℃保存，有效期6個(gè)月；或者4℃放置，有效期3個(gè)月。

操作步驟

      1. 貼壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染前準(zhǔn)備工作：

            a) 轉(zhuǎn)染前一天，將細(xì)胞以合適的密度均勻種植于孔板中，以正式轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯聚至70-85%為宜；

            b) 轉(zhuǎn)染前，去除原細(xì)胞培養(yǎng)基，用PBS清洗1-2次后，更換1.8 mL不含血清或者低血清（5%以下）的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，或Opti-MEM；不同細(xì)胞對(duì)于血清依賴性不同，根據(jù)具體細(xì)胞種類調(diào)整。

            c) 將換好液的細(xì)胞放置于培養(yǎng)箱中，并開始配制轉(zhuǎn)染復(fù)合物。

      2. 懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染前準(zhǔn)備工作：

            a) 轉(zhuǎn)染當(dāng)天，將適量的細(xì)胞，離心去除培養(yǎng)基后，用不含血清或者低血清（5%以下）的基礎(chǔ)培養(yǎng)基重懸；

            b) 將準(zhǔn)備好的懸浮細(xì)胞放置到培養(yǎng)箱中，并開始配制轉(zhuǎn)染復(fù)合物，轉(zhuǎn)染復(fù)合物和培養(yǎng)基之間的體積比，可以參考貼壁細(xì)胞的比值，進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。

      3. 轉(zhuǎn)染復(fù)合物準(zhǔn)備：

            a) 配制A液：100 μL不含血清的基礎(chǔ)培養(yǎng)基與2 μg質(zhì)粒DNA，吹吸混勻；

            b) 配制B液：100 μL不含血清的基礎(chǔ)培養(yǎng)基與6-8 μL PEI 40 K Transfection Reagent，吹吸混均；

            c) 將B液加到A液中，輕輕吹打混均，室溫孵育15 min，使其形成DNA-PEI轉(zhuǎn)染復(fù)合物。

      4. 轉(zhuǎn)染細(xì)胞：

            a) 將上一步得到的轉(zhuǎn)染復(fù)合物，以畫十字或者環(huán)繞的方式，滴加到之前換好液的孔板中；

            b) 手持孔板在平面上畫“8”字或其他的方式輕搖培養(yǎng)板，使其混合充分，置于37℃，5% CO₂培養(yǎng)箱中孵育；

            c) DNA-PEI轉(zhuǎn)染復(fù)合物與細(xì)胞共同孵育4-6 h即有較好的轉(zhuǎn)染效率，適當(dāng)延長或過夜孵育，轉(zhuǎn)染效率更佳。

注意事項(xiàng)

      1. 請(qǐng)使用狀態(tài)良好的健康細(xì)胞，復(fù)蘇的細(xì)胞建議至少傳代2次后再進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

      2. 請(qǐng)使用高質(zhì)量、無內(nèi)毒素的質(zhì)粒DNA。

      3. 轉(zhuǎn)染時(shí)高濃度血清以及抗生素的使用，可能會(huì)影響細(xì)胞狀態(tài)以及轉(zhuǎn)染效率。

      4. 不同的細(xì)胞耐受性、敏感性不一樣，轉(zhuǎn)染孵育時(shí)間長短，以及PEI/DNA使用比例，可視情況酌情調(diào)整。

      5. 操作時(shí)請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服，佩戴一次性手套。