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      本產(chǎn)品RNA提取液是一種用于細胞或組織總RNA提取的試劑，利用異硫氰酸胍等物質(zhì)迅速裂解細胞，使RNA釋放并萃取至苯酚中，同時內(nèi)含RNase抑制劑，防止RNA降解，保持RNA的完整性。

      冰袋（wet ice）運輸；2-8℃避光保存，有效期12個月。

自備氯仿、異丙醇、DEPC水或無RNase水（ABC4718）、75%乙醇（用DEPC水或無RNase水配制）。

1. 細胞或組織樣本裂解

貼壁細胞：去除細胞培養(yǎng)液，用適量預冷PBS清洗細胞，盡量將PBS吸除干凈。按照6孔板每孔加1 mL RNA提取液，12孔板每孔加0.5 mL RNA提取液的用量向孔板中加入RNA提取液，輕輕晃動使板底細胞充分接觸RNA提取液，移液槍吹打細胞，使細胞裂解，然后轉移至離心管中，室溫靜置5 min。

懸浮細胞：離心收集細胞，盡量將上清液吸除干凈，每1-10×106個細胞加入1 mLRNA提取液，移液槍吹打數(shù)次使細胞裂解，室溫靜置5 min。

組織樣本：組織剪切成小塊（黃豆大?。?，放入預冷的勻漿器內(nèi)，每100 mg組織加入1 mL RNA提取液，勻漿至無可見組織塊。（可選步驟：4℃，12000 g離心10 min使組織碎片分離，轉移上清至新的離心管中。）

血液樣本：新鮮血液樣本每200 μL加入800 μL RNA提取液，移液槍反復吹打混勻，室溫靜置5-10 min；如果是組織RNA穩(wěn)定保存液（ABC3037）保存的血液樣本，先經(jīng)4000-5000 rpm離心5 min，棄上層組織RNA穩(wěn)定保存液，再加入800 μL RNA提取液，移液槍反復吹打混勻，室溫靜置5-10 min。

2. RNA抽提：每1 mL RNA提取液加200 μL氯仿，渦旋混勻（推薦渦旋混勻儀ABC903002）或離心管上下顛倒劇烈晃動15 s，室溫靜置3-5 min。

3. 離心：4℃，12000 g離心15 min，小心轉移上層無色水相至新的離心管中，每毫升提取液大約可吸取500-550 μL。

4. 沉淀RNA：向上述收集的水相提取物管中加入500 μL異丙醇，輕輕顛倒混勻數(shù)次，室溫或4℃沉淀10min（或-20℃沉淀15min）。

5. 離心：4℃，12000 g離心10 min，在管底可見白色沉淀即為總RNA，棄上清。

6. 洗滌：加入1 mL 75%乙醇，顛倒混勻（至白色沉淀漂浮為佳）。4℃，12000 g離心5 min，棄上清，再高速短暫離心（5000 g離心3-5 s），用微量吸頭小心吸盡液體。

7. RNA溶解：將有RNA沉淀的離心管開口靜置3-5 min，使RNA稍微晾干，然后加入20-50 μL DEPC水或無RNase水（或者使用RNA溶解液ABC3047、ABC3048）使RNA充分溶解，即可用于濃度檢測及后續(xù)實驗，不能及時進行后續(xù)實驗時需將RNA置于-70℃保存。注意不可讓RNA過分干燥，否則很難溶解，且會影響A260/280比值。

1. 所有槍頭和離心管均需無RNA酶污染，可購買本公司無菌無酶耗材。

2. 本試劑含異硫氰酸胍和重蒸酚，避免接觸皮膚或吸入。

3. 操作時請穿實驗服，并佩戴一次性手套。