400-830-9659
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品編號(hào) |
規(guī)格 |
總鐵離子檢測試劑盒 |
ABC4319-48T |
48T |
ABC4319-96T |
96T |
產(chǎn)品描述
鐵是生物體內(nèi)重要的金屬元素之一,參與造血、氧氣運(yùn)輸、增強(qiáng)免疫、某些酶合成與反應(yīng)活性等多種生理活動(dòng)。隨著近些年鐵死亡概念的提出,鐵離子含量變化作為鐵死亡的特性之一,也表明鐵離子代謝過程與生物體的健康與疾病有著重要的關(guān)系。
本產(chǎn)品為總鐵離子檢測試劑盒(Total Iron Assay Kit),檢測原理為樣品在特殊條件下,鐵離子被充分釋放,并迅速被試劑中還原劑還原成亞鐵離子。隨后亞鐵離子和檢測探針結(jié)合,生成有色物質(zhì),并在一定濃度范圍內(nèi),生成物質(zhì)的顏色深淺和鐵離子濃度成正比。
儲(chǔ)存與運(yùn)輸
冰袋(wet ice)運(yùn)輸;2-8℃避光保存,6個(gè)月有效。
試劑盒組成
Component Number |
Component |
G4301-48T |
G4301-96T |
ABC4319-1 |
鐵離子標(biāo)準(zhǔn)品(1 mmol/L) |
0.5 mL |
0.5 mL |
ABC4319-2 |
總鐵檢測緩沖液 |
20 mL |
40 mL |
ABC4319-3 |
總鐵檢測探針 |
5 mL |
10 mL |
注意:產(chǎn)品規(guī)格以組織、細(xì)胞樣品檢測檢測體系為準(zhǔn)。
操作步驟
1. 樣品準(zhǔn)備:
1.1. 血漿、血清樣品:用試劑盒中的總鐵檢測緩沖液以樣品和緩沖液1比4比例充分混合(如有沉淀10000g離心后取上清檢測),用于后續(xù)總鐵離子檢測;
1.2. 組織樣品:請(qǐng)使用總鐵檢測緩沖液進(jìn)行勻漿裂解,其中組織和勻漿液的比例為1比9即可(0.1 g比0.9 mL);勻漿裂解后,4℃,10000 g離心10-15 min,取上清用于后續(xù)總鐵離子的檢測;
1.3. 細(xì)胞樣品:細(xì)胞收集后,使用總鐵檢測緩沖液重懸細(xì)胞,大約每1 X 107個(gè)細(xì)胞加500 μL勻漿液;勻漿裂解后,4℃,10000 g離心10-15 min,取上清用于后續(xù)總鐵離子檢測;
1.4. 鐵離子標(biāo)準(zhǔn)品:使用總鐵檢測緩沖液將鐵離子標(biāo)準(zhǔn)品(1 mmol/L)梯度稀釋(例如可設(shè)置為50/25/12.5/6.25/3.125 μmol/L,與待測樣品進(jìn)行后續(xù)檢測后,用于標(biāo)準(zhǔn)曲線法數(shù)據(jù)分析;或適當(dāng)?shù)叵♂尦梢粋€(gè)已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,與待測樣品進(jìn)行后續(xù)檢測后,用于標(biāo)準(zhǔn)品換算法數(shù)據(jù)分析;
2. 總鐵離子檢測:
注意:血漿、血清樣品與組織、細(xì)胞樣品的檢測體系和操作步驟有一定差異,因此作為參考的標(biāo)準(zhǔn)品需要在相應(yīng)的體系以及步驟下進(jìn)行檢測,才能夠進(jìn)行對(duì)應(yīng)的分析。
2.1. 血漿、血清樣品檢測——操作方式如下表所示;
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標(biāo)準(zhǔn)管 |
空白管 |
樣品管 |
總鐵離子標(biāo)準(zhǔn)品 |
50 μL |
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總鐵檢測緩沖液 |
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50 μL |
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待測樣品 |
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50 μL |
總鐵檢測緩沖液 |
50 μL |
50 μL |
50 μL |
混勻37℃孵育15 min |
|||
檢測探針 |
100 μL |
100 μL |
100 μL |
37℃孵育40 min,使用酶標(biāo)儀檢測593 nm處吸光度 |
2.2. 組織、細(xì)胞樣品檢測——操作方式如下表所示;
|
標(biāo)準(zhǔn)管 |
空白管 |
樣品管 |
總鐵離子標(biāo)準(zhǔn)品 |
100 μL |
|
|
總鐵檢測緩沖液 |
|
100 μL |
|
待測樣品 |
|
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100 μL |
總鐵檢測緩沖液 |
100 μL |
100 μL |
100 μL |
混勻37℃孵育15分鐘 |
|||
檢測探針 |
100 μL |
100 μL |
100 μL |
37℃孵育40 min,10000 g離心5 min,取上清200 μL于酶標(biāo)板中,酶標(biāo)儀檢測593 nm處吸光度 |
3. 數(shù)據(jù)分析:
數(shù)據(jù)分析前,可通過BCA蛋白定量檢測試劑盒對(duì)待測樣品進(jìn)行蛋白濃度檢測
注意:總鐵檢測緩沖液為特殊緩沖液,用其勻漿可使檢測數(shù)據(jù)更加準(zhǔn)確,但是會(huì)干擾BCA檢測,如果樣品不能分部分用于檢測BCA,濃度計(jì)算也可以用組織濕重(例如:g)或者細(xì)胞量(例如:10^6個(gè))來計(jì)算。
3.1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線法:
3.1.1. 根據(jù)梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)組值-空白組值數(shù)據(jù)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:Y=a X+ b(Y為標(biāo)準(zhǔn)組值-空白組值;X為鐵離子標(biāo)準(zhǔn)品濃度;a為標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率;b為標(biāo)準(zhǔn)曲線截距);
3.1.2. 血清血漿樣品總鐵離子濃度計(jì)算:
3.1.3. 組織、細(xì)胞樣品總鐵離子濃度計(jì)算:
3.2. 標(biāo)準(zhǔn)品換算法:
3.2.1. 單位血清血漿樣品總鐵離子濃度計(jì)算:
單位樣品總鐵離子濃度(μmol/L)=(樣品組值-空白組值)/(標(biāo)準(zhǔn)組值-空白組值)×標(biāo)準(zhǔn)品總鐵離子濃度(μmol/L)×樣品稀釋倍數(shù)
3.2.2. 組織、細(xì)胞樣品總鐵離子濃度計(jì)算:
單位樣品總鐵離子濃度(μmol/gprot)=(樣品組值-空白組值)/(標(biāo)準(zhǔn)組值-空白組值)×標(biāo)準(zhǔn)品總鐵離子濃度(μmol/L)×樣品稀釋倍數(shù)/組織或細(xì)胞蛋白濃度(gprot/L)
注意事項(xiàng)
1. 使用前輕輕晃動(dòng)各類試劑,確保各成分均勻條件下使用。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品換算法分析數(shù)據(jù)時(shí),需待測樣品和標(biāo)準(zhǔn)品濃度處于試劑盒線性檢測量程內(nèi);標(biāo)準(zhǔn)曲線法分析數(shù)據(jù)時(shí),確保標(biāo)準(zhǔn)曲線R2>0.99。
3. 避免使用鐵制物品處理或轉(zhuǎn)移樣品。
4. 為了您的健康和安全,操作時(shí)請(qǐng)穿好實(shí)驗(yàn)服、戴好手套。
附錄:技術(shù)參數(shù)
檢測指標(biāo) |
總鐵離子濃度 |
樣品類型 |
血清(漿)、組織、細(xì)胞 |
檢測靈敏度及范圍 |
0.762 μmol/L;0.762-50 μmol/L |
回收率 |
>99% |
批內(nèi)CV |
<5% |
批間CV |
<5% |
本產(chǎn)品僅供科研用途,不用于臨床診斷!
(產(chǎn)品包裝升級(jí)中,以實(shí)物為準(zhǔn)。)
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