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      考馬斯亮藍(lán)G250能與蛋白質(zhì)快速結(jié)合?？捡R斯亮藍(lán)G250在游離狀態(tài)下呈紅色，最大光吸收在488 nm，其與蛋白質(zhì)結(jié)合后在595 nm處有最大吸收值，并且光吸收值與蛋白質(zhì)含量成正比，因此可用于蛋白質(zhì)的定量檢測。本產(chǎn)品也可以作為ABC2019 Bradford法蛋白定量檢測試劑盒的補(bǔ)充試劑。

儲(chǔ)存與運(yùn)輸

      常溫保存與運(yùn)輸，有效期12個(gè)月。

使用方法

      1. （可選）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（酶標(biāo)儀法）：將BSA用水溶解配制0.5 mg/mL的蛋白標(biāo)準(zhǔn)工作液。將蛋白標(biāo)準(zhǔn)工作液分別按0，1，2，4，8，12，16，20 μL加到96孔板中，然后用PBS或生理鹽水依次加20，19，18，16，12，8，4，0 μL將上述梯度工作液補(bǔ)足到20 μL。得到蛋白濃度依次為0，25，50，100，200，300，400，500 μg/mL的梯度曲線。如只是做相對(duì)定量比較，則無需繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

      2. 準(zhǔn)備待測樣品：將待測的蛋白樣品進(jìn)行適當(dāng)稀釋（可通過預(yù)實(shí)驗(yàn)檢測，使樣品蛋白濃度在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)，確保檢測結(jié)果可信），按照每個(gè)樣品20 μL的量加到96孔板中。待測樣品稀釋需與蛋白標(biāo)準(zhǔn)品用相同溶液。

      3. 檢測：向以上每孔加入200 μL考馬斯亮藍(lán)G250溶液充分混勻（可將96孔板放在振蕩器上振蕩30 s），室溫放置3-5 min后，以標(biāo)準(zhǔn)曲線0號(hào)做參比，在595 nm波長下比色測定，記錄各孔吸光度值。

      4. 計(jì)算：以標(biāo)準(zhǔn)曲線中梯度蛋白含量（μg/mL）為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)所測樣品的吸光值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上即可查得相應(yīng)孔中待測樣品的蛋白濃度（μg/mL），再乘以樣品稀釋倍數(shù)即為待測樣品實(shí)際蛋白濃度。

            另：如用分光光度計(jì)測定，則用玻璃試管或玻璃比色管為反應(yīng)容器制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。待測蛋白樣品做適當(dāng)稀釋后，加入到新的玻璃試管或比色管中，樣品量為1 mL。向標(biāo)準(zhǔn)曲線梯度管及樣品管中各加入考馬斯亮藍(lán)G250溶液3 mL，充分混勻，室溫靜置3-5 min后用分光光度計(jì)進(jìn)行比色檢測。

            檢測時(shí)分光光度計(jì)波長設(shè)置595 nm，以標(biāo)準(zhǔn)曲線0號(hào)管為參比調(diào)零，檢測標(biāo)準(zhǔn)曲線及待測樣品。按照步驟4的方法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線及計(jì)算待測樣品中的蛋白濃度。

注意事項(xiàng)

      1. 本產(chǎn)品使用前需恢復(fù)至室溫，并顛倒混勻，以免影響檢測的靈敏度。

      2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。