国产精品亚洲片在线va_日本香蕉视频ww_午夜大胆性人体_亚洲中文字幕网

      熒光素酶體系多用于報(bào)告基因檢測。將目的基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件克隆到熒光素酶（Luciferase）的上下游，構(gòu)建成報(bào)告基因（Reporter gene）質(zhì)粒。然后將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染導(dǎo)入細(xì)胞，用藥物或者其他刺激物處理轉(zhuǎn)染的細(xì)胞后，收集細(xì)胞并裂解，測定裂解液中的熒光素酶活性。通過熒光素酶活性判斷藥物等外源刺激對目的基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。而雙熒光體系，引入兩類熒光且檢測互不干擾，一組作為檢測熒光，一組作為內(nèi)參熒光來消除細(xì)胞數(shù)量、轉(zhuǎn)染效率等的差異。

      本產(chǎn)品Dual-Lumi雙熒光素酶(Firefly&Ranilla Luciferase)報(bào)告基因檢測試劑盒，先以螢火蟲熒光素為底物，來檢測螢火蟲熒光素酶活性，之后在淬滅螢火蟲熒光的同時(shí)，以腔腸素為底物檢測海腎熒光素酶活性。試劑盒具有檢測迅速、靈敏度高、檢測范圍廣，且兩類熒光檢測互不干擾等特點(diǎn)。

儲(chǔ)存與運(yùn)輸

      干冰(dry ice)運(yùn)輸；-80℃避光保存，12個(gè)月有效；-20℃避光保存，建議6個(gè)月內(nèi)使用。

操作步驟

      1. 配制1×熒光素酶反應(yīng)工作液：

            1.1. 試劑盒各組分取出于室溫解凍融化，顛倒混勻，確保各組分完全溶解。其中Firefly Luciferase Reaction Substrate (50×) 和 Ranilla Luciferase Reaction Substrate (50×)需置于冰上融化，離心機(jī)短時(shí)離心，確保試劑沉至管底；

            1.2. 將Firefly Luciferase Reaction Substrate (50×) 用 Firefly Luciferase Reaction Buffer稀釋50倍，即10 μL Firefly Luciferase Reaction Substrate (50×) 與 490 μL Firefly Luciferase Reaction Buffer混勻，得到500 μL 1×螢火蟲熒光素酶反應(yīng)工作液備用；

            1.3. 將Ranilla Luciferase Reaction Substrate (50×) 用 Ranilla Luciferase Reaction Buffer稀釋50倍，即10 μL Ranilla Luciferase Reaction Substrate (50×) 與490 μL Ranilla Luciferase Reaction Buffer混勻，得到500 μL 1×海腎熒光素酶反應(yīng)工作液備用；

            (注意按照用量配制，避免浪費(fèi)。熒光素酶反應(yīng)工作液建議現(xiàn)配現(xiàn)用，置于-20℃保存需在一個(gè)月內(nèi)使用，避免反復(fù)凍融。)

      2. 細(xì)胞前處理以及裂解：

            2.1. 細(xì)胞提前種植于相應(yīng)孔板中，并根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，對細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染或其他相關(guān)前處理；

            2.2. 對于貼壁細(xì)胞：去除原有細(xì)胞培養(yǎng)基后，參考下表加入對應(yīng)量的Cell Lysis Buffer，使其覆蓋細(xì)胞；對于懸浮細(xì)胞，轉(zhuǎn)移細(xì)胞到離心管中，離心去除培養(yǎng)基后，參考下表加入對應(yīng)量的Cell Lysis Buffer重懸細(xì)胞；

            2.3. 室溫充分裂解10-20 min后，刮取細(xì)胞收集于1.5 mL離心管中，4℃，12000 g離心10 min，留取上清（細(xì)胞裂解物）備用；

      3. 熒光檢測：

            3.1. 將提前配制好的1×螢火蟲熒光素酶反應(yīng)工作液和1×海腎熒光素酶反應(yīng)工作液平衡至室溫；

            3.2. 1×螢火蟲熒光素酶反應(yīng)工作液以100 μL/孔，加入到不透光的白色96孔板中；

            3.3. 第2步的細(xì)胞裂解上清，以20 μL/孔加到上述96孔板中；

            3.4. 水平震蕩均勻，盡快使用Luminometer發(fā)光計(jì)、帶化學(xué)發(fā)光檢測模塊的多功能酶標(biāo)儀或其它能夠檢測生物發(fā)光的儀器，進(jìn)行化學(xué)發(fā)光檢測——檢測螢火蟲熒光素酶報(bào)告基因活性（熒光強(qiáng)度）；

            3.5. 1×海腎熒光素酶反應(yīng)工作液以100 μL/孔，加入到上述檢測完螢火蟲熒光素酶報(bào)告基因活性的孔中；

            3.6. 水平震蕩均勻，盡快使用Luminometer發(fā)光計(jì)、帶化學(xué)發(fā)光檢測模塊的多功能酶標(biāo)儀或其它能夠檢測生物發(fā)光的儀器，進(jìn)行化學(xué)發(fā)光檢測——檢測海腎熒光素酶報(bào)告基因活性（熒光強(qiáng)度）。

注意事項(xiàng)

      1. 檢測前，需要將提前配制的1×熒光素酶反應(yīng)工作液恢復(fù)至室溫再使用。

      2. Luciferase Reaction Buffer解凍后有部分沉淀析出，屬于正?，F(xiàn)象，使用前充分震蕩以確保其完全溶解。

      3. 1×熒光素酶反應(yīng)工作液易發(fā)生氧化反應(yīng)，進(jìn)行多樣品檢測時(shí)，1×熒光素酶反應(yīng)工作液添加應(yīng)盡量控制在短時(shí)間內(nèi)，建議使用排槍進(jìn)行加樣，并注意排槍各孔的吸液量是否一致。

      4. 為了防止孔間信號(hào)干擾，推薦使用不透光白色孔板。

      5. 為了您的健康和安全，操作時(shí)請穿好實(shí)驗(yàn)服、戴好手套。