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      熒光素酶體系多用于報(bào)告基因檢測(cè)。將目的基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件克隆到熒光素酶（Luciferase）的上下游，構(gòu)建成報(bào)告基因（Reporter gene）質(zhì)粒。然后將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染導(dǎo)入細(xì)胞，用藥物或者其他刺激物處理轉(zhuǎn)染的細(xì)胞后，收集細(xì)胞并裂解，測(cè)定裂解液中的熒光素酶活性。通過熒光素酶活性判斷藥物等外源刺激對(duì)目的基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。

      本產(chǎn)品Mono-Lumi海腎熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒（Mono-Lumi Ranilla Luciferase Reporter Gene Assay Kit），利用海腎熒光素酶(Ranilla Luciferase)，在氧氣存在的情況下，催化腸腔素底物(Coelenterazine)氧化生成Coelenteramide，并在此過程中產(chǎn)生生物熒光，產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度和熒光素酶活性成正比的原理，可快速檢測(cè)海腎熒光素酶活性。試劑盒具有檢測(cè)迅速、靈敏度高，檢測(cè)范圍廣等特點(diǎn)。

儲(chǔ)存與運(yùn)輸

      干冰(dry ice)運(yùn)輸；-80℃避光保存，12個(gè)月有效；-20℃避光保存，建議6個(gè)月內(nèi)使用。

操作步驟

      1. 配制1×海腎熒光素酶反應(yīng)工作液：

            1.1. 試劑盒各組分取出于室溫解凍融化，顛倒混勻，確保各組分完全溶解。其中Ranilla Luciferase Reaction Substrate (50×) 需置于冰上融化，離心機(jī)短時(shí)離心，確保試劑沉至管底；

            1.2. 將Ranilla Luciferase Reaction Substrate (50×) 用 Ranilla Luciferase Reaction Buffer稀釋50倍，即10 μL Ranilla Luciferase Reaction Substrate (50×) 與 490 μL Ranilla Luciferase Reaction Buffer混勻，得到500 μL 1×海腎熒光素酶反應(yīng)工作液備用；

            （注意按照用量配制，避免浪費(fèi)。1×海腎熒光素酶反應(yīng)工作液建議現(xiàn)配現(xiàn)用。）

      2. 細(xì)胞前處理以及裂解：

            2.1. 細(xì)胞提前種植于相應(yīng)孔板中，并根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染或其他相關(guān)前處理；

            2.2. 對(duì)于貼壁細(xì)胞：去除原有細(xì)胞培養(yǎng)基后，參考下表加入對(duì)應(yīng)量的Cell Lysis Buffer，使其覆蓋細(xì)胞；對(duì)于懸浮細(xì)胞，轉(zhuǎn)移細(xì)胞到離心管中，離心去除培養(yǎng)基后，參考下表加入對(duì)應(yīng)量的Cell Lysis Buffer重懸細(xì)胞；

            2.3. 室溫充分裂解10-20 min后，刮取細(xì)胞收集于1.5 mL離心管中，4℃，12000 g離心10 min，留取上清（細(xì)胞裂解物）備用；

      3. 海腎熒光素酶檢測(cè)：

            3.1. 將提前配制好的1×海腎熒光素酶反應(yīng)工作液平衡至室溫，以100 μL/孔，加入到不透光的白色96孔板中；

            3.2. 第2步留取的細(xì)胞裂解上清，以20 μL/孔加到上述96孔板中；

            3.3. 水平震蕩均勻，立即用Luminometer發(fā)光計(jì)、帶化學(xué)發(fā)光檢測(cè)模塊的多功能酶標(biāo)儀或其它能夠檢測(cè)生物發(fā)光的儀器，進(jìn)行化學(xué)發(fā)光檢測(cè)。

注意事項(xiàng)

      1. 檢測(cè)前，需要將提前配制的1×海腎熒光素酶反應(yīng)工作液恢復(fù)至室溫再使用。

      2. Ranilla Luciferase Reaction Buffer解凍后有部分沉淀析出，屬于正?，F(xiàn)象，使用前充分震蕩以確保其完全溶解。

      3. 進(jìn)行多樣品檢測(cè)時(shí)，1×海腎熒光素酶反應(yīng)工作液添加應(yīng)盡量控制在短時(shí)間內(nèi)，建議使用排槍進(jìn)行加樣，并注意排槍各孔的吸液量是否一致。

      4. 為了防止孔間干擾，推薦使用不透光白色孔板。亦可使用不透光黑色孔板，但是黑色會(huì)吸收熒光信號(hào)，降低檢測(cè)的熒光信號(hào)。

      5. 為了您的健康和安全，操作時(shí)請(qǐng)穿好實(shí)驗(yàn)服、戴好手套。