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      Acridine orange ，吖啶橙，是一種細胞核熒光染料，具有膜通透性，能透過細胞膜，使核DNA 和 RNA 染色。它與細胞中 DNA 和 RNA 結(jié)合量存在差別，可發(fā)出不同顏色的熒光，與 DNA 結(jié)合發(fā)綠色熒光，與 RNA 結(jié)合發(fā)桔黃色或桔紅色熒光。這一特性使得它常被用于檢測細胞周期，也可用于檢測細胞溶酶體。

產(chǎn)品信息

      化學(xué)名：Acridine orange

      分子式：C17H20ClN3

      分子量：301.82

      CAS號碼：65-61-2

實驗操作

      方法一：

      1.收集細胞(采用流式細胞儀檢測時，應(yīng)先固定細胞)，用PBS 清洗細胞1 次，計數(shù)并調(diào)節(jié)細胞濃度至106/ml。

      2.取適量的細胞懸液，加入AO 染色液(1mg/ml)，使AO 終濃度為8.5～17μg/ml，輕輕混勻。

      3.室溫避光染色15～20min，滴加于載玻片上并加蓋玻片或上流式細胞儀分析。

      4.熒光顯微鏡下觀察(激發(fā)濾光片波長488nm，阻斷濾光片波長515nm)，計數(shù)并拍照。

      方法二：

      1. Acridine orange 的推薦工作濃度為 1 μg/ml，使用前可先溶于純水配制成濃度為 100 μg/ml 的染色儲備液。

      2. 對于貼壁細胞或細胞爬片：先吸除培養(yǎng)基，用 PBS 清洗兩遍去除殘余培養(yǎng)基和未貼壁細胞，加入新的 PBS；如需觀察全部細胞特性，保留未貼壁細胞，可直接在培養(yǎng)基中加入染色液。

      3. 對于懸浮細胞：可直接加入工作液或離心收集細胞后在 PBS 中加入染色液。

      4. 推薦的染色孵育時間為 5-15 分鐘。但由于不同細胞對 Acridine orange 的攝取能力不同，需根據(jù)具體的細胞類型摸索最佳的染色條件。

案例分析

注意事項

      熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。