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      Fluo-4是一種將Fluo-3結(jié)構(gòu)中的Cl替換成F的鈣熒光探針。由于將Cl替換成了電子吸引力更強(qiáng)的F，它的最大激發(fā)波長(zhǎng)會(huì)向短波長(zhǎng)處偏離10 nm左右。這個(gè)波長(zhǎng)更接近于氬激光器的波長(zhǎng)，所以用氬激光器激發(fā)時(shí)，F(xiàn)luo-4的熒光強(qiáng)度比Fluo-3強(qiáng)一倍。

      Fluo-4, AM穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞后被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fluo-4，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)，F(xiàn)luo-4若以游離配體形式存在時(shí)幾乎是非熒光性的，但是當(dāng)它與細(xì)胞內(nèi)鈣離子結(jié)合后可以產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光，最大激發(fā)波長(zhǎng)為494nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為516nm?？梢允褂眉す夤簿劢癸@微鏡或流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的變化。

儲(chǔ)存條件

      -20℃干燥避光保存，有效期一年。

產(chǎn)品性質(zhì)

      CAS：273221-67-3

      中文名：鈣熒光探針Fluo-4, AM

      英文名：1-[2-Amino-5-(2,7-difluoro-6-hydroxy-3-oxo-9-xanthenyl)phenoxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N',N'-tetraacetic acid, pentaacetoxymethyl ester

      分子式：C51H50F2N2O23

      分子量：1096.94

操作說(shuō)明（for Human T cells）

（1） 試劑

      2 mM的Fluo-4, AM/DMSO（將1mg Fluo-4, AM溶于442μL DMSO）

      Pluronic F127

      Hanks?balanced salt solution（HBSS）

      HEPES buffer saline（10mM HEPES，1mM Na2HPO4，137mM NaCl，5mM KCl，1mM CaCl2，0.5mM MgCl2，5mM glucose，0.1% BSA，pH 7.4）

（2） 操作

      ①. 向Fluo-4, AM/DMSO溶液中加入16.5mg Pluronic F127，Pluronic F127可以防止Fluo-4, AM在HBSS中聚合并能幫助其進(jìn)入細(xì)胞。

      ②. 用HBSS稀釋Fluo-4, AM溶液，制備4μM的Fluo-4, AM工作液。

      ③. 將Fluo-4, AM工作液加入細(xì)胞，在37℃培養(yǎng)20分鐘。

      ④. 加入5倍體積的含有1%胎牛血清的HBSS，再繼續(xù)培養(yǎng)40分鐘。

      ⑤. 用HEPES buffer saline洗滌細(xì)胞3次，然后用HEPES buffer saline使細(xì)胞重懸浮，制成1×105 cells/mL的溶液。

      ⑥. 37℃下培養(yǎng)10分鐘，然后用該細(xì)胞進(jìn)行熒光鈣離子檢測(cè)。激發(fā)波長(zhǎng)494nm，發(fā)射波長(zhǎng)516nm。

      標(biāo)記的條件因細(xì)胞種類而異，在每次實(shí)驗(yàn)前，請(qǐng)先確定最佳條件。以上方法僅供參考。