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      JC-1 是一種廣泛用于檢測線粒體膜電位△Ψm的理想熒光探針。它以電勢依賴性的方式積聚在線粒體內(nèi)，可以用來檢測細胞、組織或純化的線粒體膜電位。正常細胞線粒體內(nèi)膜電位較高，JC-1 聚集在線粒體的基質(zhì)中形成聚合物，可以產(chǎn)生紅色熒光；而在受損的線粒體中由于膜電位的下降或喪失，JC-1 不能聚集在線粒體的基質(zhì)中，此時JC-1 為單體，可以產(chǎn)生綠色熒光。這樣就可以非常方便地通過熒光顏色的轉(zhuǎn)變來檢測線粒體膜電位的變化。常用紅綠熒光的相對比例來衡量線粒體去極化的程度。

      線粒體膜電位的下降是細胞凋亡早期的一個標志性事件。通過 JC-1 從紅色熒光到綠色熒光的轉(zhuǎn)變可以很容易地檢測到細胞膜電位的下降，同時也可以用 JC-1 從紅色熒光到綠色熒光的轉(zhuǎn)變作為細胞凋亡早期的一個檢測指標。

      JC-1 單體的最大激發(fā)波長為 514 nm，最大發(fā)射波長為 529 nm；JC-1 聚合物的最大激發(fā)波長為 585 nm，最大發(fā)射波長為 590 nm。實際觀察時，使用常規(guī)的觀察紅色熒光和綠色熒光的設(shè)置即可。

產(chǎn)品參數(shù)

      激發(fā)/發(fā)射波長：514/529 nm；585/590 nm

      運輸條件：常溫

      儲存條件：2-8℃，避光

      分子式：C25H27Cl4IN4

      分子量：652.23

      CAS號：47729-63-5

實驗步驟

      配制儲存液：使用 DMSO 溶解 JC-1 粉末，配制成 1 mg/ml 的儲存液。為了避免反復(fù)凍融，建議將儲存液小體積分裝，置于≤–20°C 條件下保存。

      熒光顯微鏡觀察

      1 染色

      根據(jù)不同的細胞類型選擇不同的染色條件，可以參考表 1。染色液孵育之后，通常需要對細胞樣本進行洗滌處理。

      2 選擇濾光片

      根據(jù) JC-1 的分析形態(tài)，選擇合適的濾光片進行熒光顯微鏡鏡檢，可以參考表 2。如果使用激光共聚焦熒光顯微鏡進行鏡檢，JC-1 單體及聚合體可以同時被488 nm 氬離子激光器激發(fā)，JC-1 聚合體可以被 568 nm 氬氪激發(fā)波長激發(fā)。

      流式細胞儀觀察

      1 染色

      根據(jù)不同的細胞類型選擇不同的染色條件，可以參考表 1。在染色之前，需要調(diào)整細胞密度至合適的濃度，一般以 1 × 10^6 cells/ml 為宜。

      2 檢測通道

      使用 488 nm 氬離子激光器激發(fā)，JC-1 單體及聚合體分別可以被流式細胞儀FL1、FL2 通道檢測到。

注意事項

      為避免反復(fù)凍融，建議適當(dāng)分裝。

      對于微量的液體，每次使用前請先高速離心數(shù)秒，使液體充分沉降到管底。

      熒光染料不可避免的存在淬滅問題，請存放及操作時盡量注意避光，以減緩熒光的淬滅。

      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。