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      本產(chǎn)品紅細(xì)胞裂解液（Red Blood Cell Lysis Buffer，或稱ACK Lysis Buffer），是一種經(jīng)典的用于去除紅細(xì)胞的裂解液，在不損傷有核細(xì)胞的前提下充分去除紅細(xì)胞。經(jīng)紅細(xì)胞裂解液裂解得到的組織細(xì)胞中不含紅細(xì)胞，可進(jìn)一步用于原代培養(yǎng)、細(xì)胞融合、流式細(xì)胞分析、核酸與蛋白的分離及提取等。其基本原理是利用細(xì)胞內(nèi)滲透壓濃度差而導(dǎo)致細(xì)胞膜脹破的原理裂解紅細(xì)胞。主要成分包含氯化銨、碳酸氫鉀、EDTA-Na2。因銨根離子無(wú)法通過(guò)細(xì)胞膜，而其他離子可以通過(guò)，造成細(xì)胞內(nèi)外的離子濃度差異，外部水分?jǐn)U散至細(xì)胞內(nèi)，使紅細(xì)胞膨脹，達(dá)到裂解效果。本產(chǎn)品經(jīng)0.2 μm濾膜過(guò)濾除菌。

儲(chǔ)存與運(yùn)輸

      冰袋（wet ice）運(yùn)輸；2-8℃保存，有效期12個(gè)月。

使用方法

組織/細(xì)胞樣本：

      1. 新鮮組織經(jīng)胰酶或膠原酶等消化分散成單個(gè)細(xì)胞懸液，4℃條件下300-400 g離心5 min，棄去上清液；

      2. 向細(xì)胞沉淀中加入3-5 mL紅細(xì)胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解1-2 min；

      3. 4℃條件下300-400 g離心5-8 min，棄去上層紅色清液；如裂解不完全可重復(fù)步驟2和3；

      4. 向沉淀部分加入3-5 mL Hank’s液或無(wú)血清培養(yǎng)液重懸，然后4℃條件下300-400 g離心3-5 min，重復(fù)此步驟2-3次，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行清洗；

      5. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；如提取RNA，在步驟4開始使用無(wú)核酸酶的溶液。

血液樣本：

      1. 新鮮抗凝血，離心棄去上清液；

      2. 預(yù)估細(xì)胞沉淀體積，按1:6-10比例向細(xì)胞沉淀中加入2-8℃預(yù)冷的紅細(xì)胞裂解液，例如對(duì)于0.2 mL細(xì)胞沉淀，加入1.2-2.0 mL紅細(xì)胞裂解液，輕輕吹打混勻，4℃或室溫裂解1-5 min；

      3. 4℃條件下300-400 g離心5-8 min，棄去上層紅色清液；如發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不完全，可重復(fù)步驟2和3一次；

      4. 向沉淀部分加入Hank’s液或無(wú)血清培養(yǎng)液重懸，然后4℃條件下300-400 g離心3-5 min，重復(fù)此步驟2-3次，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行清洗；

      5. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；如提取RNA，最好是于步驟4開始使用無(wú)核酸酶的溶液。

注意事項(xiàng)

      1. 本品經(jīng)過(guò)濾除菌，使用時(shí)請(qǐng)注意無(wú)菌操作，避免細(xì)菌污染。

      2. 后續(xù)試驗(yàn)如是用于細(xì)胞培養(yǎng)，操作過(guò)程中應(yīng)注意在超凈工作臺(tái)中完成，并注意無(wú)菌操作，以免細(xì)胞被污染，影響細(xì)胞培養(yǎng)。

      3. 在離心洗滌后，如發(fā)現(xiàn)極微量的紅細(xì)胞，可繼續(xù)試驗(yàn)，不會(huì)影響后續(xù)檢測(cè)。

      4. 操作時(shí)請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服，佩戴一次性手套。