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      本產(chǎn)品是適用于兔外周血淋巴細(xì)胞分離的梯度密度分離液，其原理主要是根據(jù)外周血不同細(xì)胞之間的密度差異（紅細(xì)胞和粒細(xì)胞密度大約為1.090 g/mL；血小板密度1.030-1.035 g/mL；淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞密度1.075-1.090 g/mL），通過梯度密度離心，將淋巴細(xì)胞從外周血中分離出來。本產(chǎn)品為無菌、低內(nèi)毒素水平的即用型分離液，液密度為1.081±0.001 g/mL（20℃）。本產(chǎn)品在傳統(tǒng)Ficoll-泛影葡胺基礎(chǔ)上進(jìn)行了優(yōu)化，能夠在血液加入后較長的時(shí)間內(nèi)維持分離液的穩(wěn)定性，使用操作簡單且分離的淋巴細(xì)胞純度高、狀態(tài)好。

儲存與運(yùn)輸

      冰袋(wet ice)運(yùn)輸；2-8℃避光保存，有效期12個月。

操作步驟

      以分離1 mL兔外周血淋巴細(xì)胞分離為例，血液和淋巴細(xì)胞分離液體積比為1:1-1:2，在此范圍內(nèi)適當(dāng)調(diào)整；選擇離心管時(shí)需注意，血液和淋巴細(xì)胞分離液總體積不超過離心管容積的三分之二。

      1. 取新鮮抗凝全血（肝素、EDTA、枸櫞酸鈉等抗凝劑皆可）1 mL，加入等體積PBS（推薦ABC4220）或者無鈣鎂Hanks緩沖液（推薦ABC4221）稀釋，即得到2 mL稀釋的全血；

      2. 吸取兔外周血淋巴細(xì)胞分離液3 mL加入到15 mL無菌離心管（推薦ABC-1500-J）中；

      3. 將離心管傾斜45度角，將2 mL稀釋后的血液沿管壁緩慢加入到離心管中，使血液平鋪在兔外周血淋巴細(xì)胞分離液上層；

      4. 建議使用水平轉(zhuǎn)頭離心機(jī)離心，將離心管置于水平轉(zhuǎn)頭適配器中，降低離心機(jī)加減速（3-5檔為宜），室溫條件下800 g離心25 min；

      5. 離心后，輕拿離心管置于管架上，可觀察到明顯的分層現(xiàn)象：最上層是血漿層；中上白膜層是淋巴細(xì)胞層；中下層為淋巴細(xì)胞分離液層；最下層為紅細(xì)胞和粒細(xì)胞層（參考附圖）；

      6. 吸棄最上層血漿層，小心吸取白膜層（淋巴細(xì)胞層）至另一個潔凈的無菌離心管中；

      7. 用8 mL PBS（推薦ABC4220）或其他緩沖液洗滌后，100 g離心10 min，棄上清；

      8. 重復(fù)步驟7（可選）；

      9. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康挠盟枧囵B(yǎng)基或緩沖液重懸淋巴細(xì)胞；

      10. 將重懸淋巴細(xì)胞種植到培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中，于培養(yǎng)箱中靜置孵育1-2 h，吸取細(xì)胞重新轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中，可以進(jìn)一步提高淋巴細(xì)胞純度（可選）。

注意事項(xiàng)

      1. 本產(chǎn)品在使用前需室溫充分平衡并顛倒混勻，分離時(shí)溫度以18-25℃為宜。

      2. 為保持淋巴細(xì)胞的活性，血液最好選取采血2 h以內(nèi)的新鮮抗凝血液；如需對分離的淋巴細(xì)胞進(jìn)行進(jìn)一步的培養(yǎng)和檢測，請?jiān)诓裳头蛛x的過程中注意無菌操作。

      3. 稀釋或洗滌緩沖液，不可使用含鈣、鎂離子的緩沖液，以免導(dǎo)致血細(xì)胞凝聚。

      4. 過多的吸取白膜層以外的成分，會導(dǎo)致交界處的一些粒細(xì)胞或血小板等被混入。

      5. 由于不同血液樣本間的差異，可能對分離效果產(chǎn)生影響?？蛻艨筛鶕?jù)實(shí)際情況適當(dāng)調(diào)整離心力和時(shí)間，參考離心力和時(shí)間范圍為：500-1000 g、20-30 min。

      6. 將血液和淋巴細(xì)胞分離液混合一定時(shí)間后，出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降屬于正常現(xiàn)象。

      7. 為了您的健康和安全，操作時(shí)請穿好實(shí)驗(yàn)服、戴好手套。