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      CDCFDA SE 是可固定、可滲透細(xì)胞的熒光素示蹤劑，是一種 FDA 衍生物，已被廣泛證實(shí)熒光標(biāo)記細(xì)胞能有效確定總細(xì)胞的數(shù)量和一個(gè)樣本中存在多少活細(xì)胞。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)合熒光染色法是分析非均質(zhì)細(xì)胞種群的有力工具。

      FDA 和它的衍生物無熒光分子進(jìn)入細(xì)胞后被胞內(nèi)無特異性的酯酶所水解產(chǎn)生熒光。這些熒光產(chǎn)物只能積聚在具有完整細(xì)胞膜的細(xì)胞中。因此，死細(xì)胞無完整細(xì)胞膜不能被染色。FDA 具備精確地膜轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)力學(xué)和胞內(nèi)水解作用或者類似物（CDCFDA）相關(guān)的細(xì)胞功能，因此可以通過熒光顯微鏡或者流式細(xì)胞儀來檢測 FDA 標(biāo)記的細(xì)胞。過 FDA 熒光標(biāo)記的細(xì)胞在細(xì)胞系或者菌株中存在變化，可能是由于不同胞內(nèi)酯酶的活性所造成的?；罴?xì)胞熒光示蹤探針CDCFDA，琥珀酰亞胺酯是一個(gè)胺化 FDA 衍生物，可以用來制備各種 FDA 偶聯(lián)物。

      本品為固體形式，使用前需溶解于 DMSO 中以配制成儲備液。

產(chǎn)品信息

      化學(xué)名：5-(and-6)-Carboxy-2’,7’-dichlorofluorescein Diacetate, succinimidyl ester

      分子式：C25H17Cl2NO11

      分子量：626.36

      CAS號：147265-60-9

細(xì)胞制備與染色

      注意：不同的實(shí)驗(yàn)體系所需的最佳染液工作濃度可能不同，需具體實(shí)驗(yàn)中摸索優(yōu)化。此處推薦的實(shí)驗(yàn)條件是基于驗(yàn)證過的特定的細(xì)胞類型。一般建議短期實(shí)驗(yàn)（如生存能力分析等），可采用 0.5~5 μM 的工作濃度；而長期染色（3 天以上）或快速分裂期的細(xì)胞染色，建議 5~25 μM 的工作濃度。另外，為減少毒性負(fù)荷，請盡可能選擇低的染料濃度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

      1. 配制染色儲備液，用 DMSO 溶解染料溶解 CDCFDA,SE，使其濃度為 10 mM。

      2. 將染色儲備液加至無血清培養(yǎng)基中，保持工作液濃度為 0.5~25 μM，孵育溫度為 37℃。

      3. 對于懸浮細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到所需要求時(shí)，即可離心收集細(xì)胞，棄上清。用預(yù)熱的染色液輕輕重懸細(xì)胞，在細(xì)胞的生長條件下孵育 15~45 分鐘后，離心；對于貼壁細(xì)胞，達(dá)到合適的融合度后，棄去培養(yǎng)基，更換以預(yù)熱的染色液，在細(xì)胞的生長條件下孵育 15~45 分鐘。

      4. 更換新鮮預(yù)熱的培養(yǎng)基，37℃孵育 30 分鐘，以保證細(xì)胞內(nèi)酯酶充分水解。

      5. 對于懸浮細(xì)胞，吸取 5 μl 左右染色后的細(xì)胞滴至載玻片上，加蓋蓋玻片，置于熒光顯微鏡下觀察；對于貼壁細(xì)胞，直接觀察即可。

      6. 如需進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)分析，可收集細(xì)胞至合適的密度，按懸浮細(xì)胞孵育標(biāo)記方法后，上機(jī)分析。

案例分析

注意事項(xiàng)

      配制好的溶液為避免反復(fù)凍融，建議適當(dāng)分裝。

      對于微量的液體，每次使用前請先高速離心數(shù)秒，使液體充分沉降到管底。

      熒光染料不可避免的存在淬滅問題，請存放操作時(shí)注意避光，以減緩熒光的淬滅。

      為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。