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      乙酰氧甲基（AM）的酯衍生物及其螯合劑組成的熒光探針廣泛應(yīng)用于活細(xì)胞研究中。羧酸經(jīng)過(guò)修飾轉(zhuǎn)化成 AM 酯基團(tuán)變成不帶電荷的分子，具有細(xì)胞膜通透性；一旦進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，親脂性的保護(hù)基團(tuán)發(fā)生非特性的水解，從而生成帶電荷形式的分子滯留于細(xì)胞內(nèi)。通常情況下，如果不發(fā)生水解，AM 酯形式的探針為無(wú)色熒光狀態(tài)；這一特性可用于判斷存儲(chǔ)液是否發(fā)生自發(fā)水解。用于熒光探針的酯基與 AM 酯類(lèi)似，處理方法基本一致。

使用指南

      注意：產(chǎn)品中不包含可能需要使用到的 20% Pluronic F-127 助溶劑，客戶需要另外購(gòu)買(mǎi)或準(zhǔn)備。

配制儲(chǔ)存液

      請(qǐng)使用高純級(jí)的無(wú)水 DMSO 溶解產(chǎn)品，DMSO 應(yīng)存放于密封好的氬或氮?dú)獠⒈３指稍铩＜兊囊阴Ｑ跫谆ˋM）或其醋酸酯在 DMSO 中的溶解度較?。s 1 mg），溶解緩慢。由于溶劑極易吸水從而導(dǎo)致染料發(fā)生降解，配制好的儲(chǔ)存液應(yīng)密封良好，在干燥條件下冷凍保存，儲(chǔ)存液在適當(dāng)?shù)臈l件下至少可以穩(wěn)定存放 6 個(gè)月，如需連續(xù)使用，請(qǐng)?jiān)谂渲坪蟊M快用完。建議用戶盡量配制高濃度的濃縮儲(chǔ)存液以減少溶液中 DMSO 的含量(理想值 ≤ 0.1%)。

使用 Pluronic F-127 助溶劑

      由于某些 AM 酯不溶于水，常常用低毒性的 Pluronic F-127®作為染料的助溶劑?？梢詫⑦@種非離子型去污劑溶于 DMSO，配成終濃度為 20%（w/v）的溶液，然后用于配制染料儲(chǔ)存液。40℃溫和加熱可以促進(jìn) Pluronic F-127®在 DMSO 中的溶解，但 Pluronic F-127®會(huì)降低乙酰氧甲基酯的穩(wěn)定性，因此建議僅在配制染色工作液時(shí)加入。

      注意：無(wú)論是否使用 Pluronic F-127®，請(qǐng)盡量將產(chǎn)品配制成高濃度濃縮儲(chǔ)存液以減少溶液中

      DMSO 的含量(理想值≤ 0.1%)。

乙酰氧甲基及其酯類(lèi)的細(xì)胞染色

      本說(shuō)明僅就產(chǎn)品向用戶作簡(jiǎn)單的介紹，請(qǐng)根據(jù)染料種類(lèi)與細(xì)胞類(lèi)型查閱文獻(xiàn)來(lái)確定具體的實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程。一般來(lái)說(shuō)，AM 酯與醋酸酯類(lèi)的使用終濃度為 1~10 μM，實(shí)驗(yàn)中盡量使用最小濃度的 AM 酯，以降低由乙酰氧甲基酯水解副產(chǎn)物（甲醛和乙酸）產(chǎn)生的假陽(yáng)性信號(hào)。染料與樣品在室溫條件下孵育，時(shí)間一般控制在 15 分鐘至 1 小時(shí)。但有研究者發(fā)現(xiàn)在 37℃的生理溫度條件下進(jìn)行染色效果更好。Pluronic F-127®可以增強(qiáng)染色效果并降低染色相遷移現(xiàn)象。為了盡量減少乙酰氧甲基酯與醋酸酯類(lèi)的細(xì)胞外水解，建議用戶盡量避免使用含有 PBS 等含仲胺和伯胺的緩沖液。另外，血清可能含有內(nèi)源性酯酶活性的物質(zhì)也必須避免，直到染色完成后。染色后須用不含染料的緩沖液沖洗細(xì)胞樣品。

案例分析