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      CMFDA 是一種可用于檢測細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和定位的綠色熒光染料。該染料信號較穩(wěn)定，可與其它熒光標(biāo)記染料很好的區(qū)分。且本染料對細(xì)胞低毒，操作方便，只需移去培養(yǎng)基，避光孵育 30 分鐘，即可成像觀察。另外，由于熒光信號可以穩(wěn)定存在至少 72 小時(shí)，因此基本上可以完成對 3-6 代細(xì)胞的示蹤分析。

產(chǎn)品參數(shù)

      激發(fā)/發(fā)射：492/517nm

      運(yùn)輸條件：室溫

      儲存條件：20℃，避光

      分子式：C25H17O7CL

      分子量：464.85

      CAS號：136832-63-8

實(shí)驗(yàn)步驟

      注意：根據(jù)不同的細(xì)胞或組織類型，以下實(shí)驗(yàn)操作步驟指南可能需要做相應(yīng)的調(diào)整。

      說明：

      ①根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的染色液濃度，建議在正式實(shí)驗(yàn)之前做了一個(gè)倍比稀釋的最佳濃度測試。

      ②通常情況下，長時(shí)間染色（超過 3 天）使用染色液濃度為 5~25 μM, 短時(shí)間染色使用低濃度的染色液濃度 0.5~5 μM，比如細(xì)胞活性分析實(shí)驗(yàn)。

      ③為了維持正常的細(xì)胞生理形態(tài)，避免給細(xì)胞帶來不必要的損傷，在達(dá)到染色效果的目的的情況下，盡可能地使用低濃度的染色液。

      1. 使用無水 DMSO 將 CMFDA 固體溶解，配制成 10 mM 的儲存液。使用無血清的培養(yǎng)基將儲存液稀釋至 0.5~25 μM 的工作液。在使用之前將工作液置于 37℃進(jìn)行預(yù)熱。

      2. 根據(jù)不同的細(xì)胞類型在不同的細(xì)胞培養(yǎng)條件下孵育 15~45 分鐘。對于懸浮細(xì)胞，離心棄上清，收集細(xì)胞沉淀。用預(yù)熱的染色液重懸細(xì)胞；對于貼壁細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞生長到合適的細(xì)胞密度，移除上清培養(yǎng)液，加入預(yù)熱的染色液。

      3. 移除染色液，加入新鮮預(yù)熱的細(xì)胞培養(yǎng)基，37℃孵育 30 分鐘。

      4. 對于懸浮細(xì)胞，吸取 5 μl 左右染色后的細(xì)胞滴至載玻片上，加蓋蓋玻片，置于熒光顯微鏡下觀察；對于貼壁細(xì)胞，直接觀察即可。

      （可選）如需固定細(xì)胞，可先跳過步驟 4，完成固定步驟后再進(jìn)行觀察準(zhǔn)備。

      5. 使用 PBS 清洗細(xì)胞。

      6. 使用含有 3.7%多聚甲醛的 PBS 固定細(xì)胞，室溫孵育 15 分鐘。

      7. 使用 PBS 清洗細(xì)胞。

      8. 如果需要可對細(xì)胞膜進(jìn)行透化處理。當(dāng)細(xì)胞需要進(jìn)行抗體標(biāo)記時(shí)，細(xì)胞膜的透化處理是有必要的，便于促進(jìn)抗原進(jìn)入細(xì)胞?？梢允褂帽浔幚砑?xì)胞 10 分鐘，可以提供細(xì)胞的滲透性。

案例分析

注意事項(xiàng)

      為避免反復(fù)凍融，建議適當(dāng)分裝。

      對于微量的液體，每次使用前請先高速離心數(shù)秒，使液體充分沉降到管底。

      熒光染料不可避免的存在淬滅問題，請存放操作時(shí)注意避光，以減緩熒光的淬滅。

      為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。