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      CFDA,SE 的英文全稱為 Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester，是一種可對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的細(xì)胞滲透性熒光染料，不僅可用于細(xì)胞增殖的體外實(shí)驗(yàn)，還可用于追蹤細(xì)胞在體內(nèi)的分裂增殖過程。CFDA,SE 可以通過細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞后可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶（esterase）催化分解成 CFSE，CFSE 可以偶發(fā)性地、不可逆地和細(xì)胞內(nèi)蛋白的賴氨酸殘基或其它氨基酸發(fā)生結(jié)合反應(yīng)，并標(biāo)記這些蛋白。加入熒光探針CFDA 后大約 24 小時(shí)，即可充分標(biāo)記細(xì)胞。被 CFDA,SE 標(biāo)記的非分裂細(xì)胞的熒光信號(hào)非常穩(wěn)定，熒光信號(hào)可穩(wěn)定保持?jǐn)?shù)月。CFSE 標(biāo)記細(xì)胞的熒光信號(hào)非常均一，優(yōu)于以前使用的其它細(xì)胞示蹤熒光探針，例如 PKH26。且分裂后的子代細(xì)胞的熒光信號(hào)分配亦很均勻。由于 CFDA,SE 標(biāo)記細(xì)胞的熒光非常均勻和穩(wěn)定，每分裂一次子代細(xì)胞的熒光信號(hào)強(qiáng)度會(huì)減弱一半，這樣通過流式細(xì)胞儀就可以檢測(cè)出沒有分裂的細(xì)胞，分裂一次的細(xì)胞（1/2 熒光信號(hào)強(qiáng)度），分裂兩次的細(xì)胞(1/4 熒光信號(hào)強(qiáng)度)，分裂三次的細(xì)胞(1/8 熒光信號(hào)強(qiáng)度)以及類似的其它分裂次數(shù)的細(xì)胞。

      CFDA,SE 標(biāo)記細(xì)胞后通常用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞分裂增殖檢測(cè)，最常用于淋巴細(xì)胞的增殖檢測(cè)，也可以用于成纖維細(xì)胞、NK 細(xì)胞等其它細(xì)胞的增殖檢測(cè)，甚至還可以用于細(xì)菌增殖的檢測(cè)。

      本品為粉末狀固體，如需長(zhǎng)期儲(chǔ)存，請(qǐng)置于-20℃干燥避光保存，有效期為 1 年。

      使用前需溶于 DMSO 配制成儲(chǔ)備液后保存?zhèn)溆谩?

產(chǎn)品參數(shù)

      化學(xué)名稱: 5-(and-6)-Carboxyfluorescein Diacetate N-succinimidyl ester

      分子式: C29H19NO11

      分子量: 557.47

      CAS 號(hào): 150347-59-4

實(shí)驗(yàn)步驟

      注意：以下是活細(xì)胞染色的推薦步驟，可根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。

      1. 離心收集細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為 1-5×105 個(gè)/管；

      2. 用 500 μl CFDA,SE 工作液懸浮細(xì)胞，于室溫或 37℃避光孵育 10-30 分鐘；

      3. 吸除染液，用 HBSS 或其他合適的緩沖液清洗細(xì)胞，用 500 μl 預(yù)熱 HBSS 或培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞；

      4. 在 Ex/Em=490/520 nm 下用流式細(xì)胞儀（FL1 通道）或熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。

實(shí)驗(yàn)說明

      1. 制備標(biāo)記儲(chǔ)存液：將 CFDA,SE 粉末溶于適量 DMSO，使其濃度為 1~5 mM（推薦直接配制成 5 mM 的濃度，之后按實(shí)際需求考慮是否需要稀釋，1 mg/ml 的 CFDA,SE 溶液濃度相當(dāng)于其摩爾濃度 1.8 mM）。

      2. 標(biāo)記細(xì)胞與檢測(cè)：CFDA, SE 工作液的濃度需根據(jù)標(biāo)記的細(xì)胞類型及時(shí)間長(zhǎng)短適當(dāng)調(diào)整優(yōu)化。

      建議短期標(biāo)記工作液濃度：0.1 μM；

      1~2 天時(shí)長(zhǎng)的示蹤標(biāo)記，工作液濃度為：1~5 μM；

      注意：標(biāo)記的細(xì)胞呈綠色熒光，檢測(cè)時(shí)的激發(fā)波長(zhǎng)可以選擇 488 nm，此時(shí)的發(fā)射波長(zhǎng)為518 nm。使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)可以采用 FL1 Detection Chanel。

案例分析

注意事項(xiàng)

      CFDA,SE 配制成儲(chǔ)存液后宜在一個(gè)月內(nèi)使用完畢，最長(zhǎng)請(qǐng)勿超過 2 個(gè)月。CFDA ,SE 易被水解，在水溶液中會(huì)很快變質(zhì)，在使用過程中應(yīng)盡量避免產(chǎn)品與水接觸（標(biāo)記細(xì)胞過程中除外）。

      CFDA,SE 溶劑在 4℃、冰浴等較低溫度情況下會(huì)凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內(nèi)?？稍?20~25℃水浴溫育片刻至全部溶解后使用。

      不同細(xì)胞其細(xì)胞內(nèi)酯酶的活性不同，因此染色效果可能會(huì)有差異。

      熒光染料不可避免的存在淬滅問題，請(qǐng)存放及操作時(shí)盡量注意避光，以減緩熒光的淬滅。

      為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。