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      疊氮溴化乙錠（Ethidium monoazide bromide，EMA）是Hixon等發(fā)現(xiàn)于上世紀70年代的核酸熒光染料，分子式為C21H18BrN5，分子量為420，不溶于水、可溶于乙醇的橙色固體。

產(chǎn)品特點

      當(dāng)樣品中死細胞活細胞共同存在時，EMA能選擇性地與死細胞DNA共價結(jié)合。

主要原理

      通常死細胞的細胞膜已經(jīng)遭到破壞，EMA很容易滲透到細胞內(nèi)部從而插入到細胞內(nèi)DNA雙螺旋上。但活菌的細胞膜比較完整，EMA不能滲透到活菌內(nèi)部。后續(xù)經(jīng)過高強度的可見光曝光處理后，插入到DNA雙螺旋上的EMA能夠與DNA雙螺旋發(fā)生共價交叉偶合，且這種共價偶合具有不可逆性，從而抑制后續(xù)PCR擴增中引物與死菌DNA的結(jié)合，達到區(qū)分死活菌的目的。

      EMA的熒光較弱，但與DNA結(jié)合后強度增加約15倍，激發(fā)/發(fā)射最大值約為504/600納米。

案例分析

      以EMA-PCR為例說明：將EMA加入到含有活菌和死菌的測試樣品中，曝光1min導(dǎo)致游離EMA穿透死亡細胞并與DNA共價結(jié)合，但不能進入活細胞。與EMA共價結(jié)合的死細胞DNA和未與EMA結(jié)合的活細胞DNA，在PCR反應(yīng)中，來自活細胞的DNA是可以與引物結(jié)合進行PCR擴增，而死細胞DNA由于與EMA的不可逆結(jié)合不能被擴增。