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      Green dead-cell nucleic acid stain是一種發(fā)綠色熒光的高親和性核酸染料，可以穿過(guò)受損的細(xì)胞質(zhì)膜而不能穿過(guò)活細(xì)胞質(zhì)膜，與核酸結(jié)合之后會(huì)得到超過(guò)500 倍顯著增強(qiáng)的熒光信號(hào)。Green dead-cell nucleic acid stain對(duì)于需要額外熒光標(biāo)記的細(xì)菌革蘭氏染色尤其適用。樣品與 Green dead-cell nucleic acid stain短暫孵育后，染料可以與死細(xì)胞中的核酸結(jié)合，使用氬離子激光激發(fā)器 488nm波長(zhǎng)（或者其它帶有 450~490nm 激發(fā)波長(zhǎng)的激發(fā)光源）激發(fā)，可以在樣品中觀察到明亮的綠色熒光。根據(jù)Green dead-cell nucleic acid stain這些特性，它可以作為一種死細(xì)胞探針，可以與熒光顯微鏡，熒光計(jì)數(shù)儀，熒光微板讀數(shù)器以及流式細(xì)胞儀等儀器匹配。

光譜特性

      Green dead-cell nucleic acid stain結(jié)合到雙鏈 DNA 中的激發(fā)、發(fā)射光譜圖

實(shí)驗(yàn)指南

      注意：本實(shí)驗(yàn)操作步驟適用于多數(shù)細(xì)胞類型，Green dead-cell nucleic acid stain的工作濃度根據(jù)不同的細(xì)胞類型而定（參考表 1）。實(shí)驗(yàn)中使用的培養(yǎng)基，細(xì)胞密度，其它存在的雜細(xì)胞等因素會(huì)對(duì)染色效果產(chǎn)生影響，如果想獲得最佳染色效果，請(qǐng)勿使用含磷酸鹽的緩沖液。玻璃容器上殘留的去污劑會(huì)將某些可引發(fā)明顯熒光信號(hào)的物質(zhì)帶入溶液中從而對(duì)染色產(chǎn)生影響，請(qǐng)使用溫和去污劑清潔實(shí)驗(yàn)中使用的玻璃容器，并用經(jīng)過(guò)蒸餾的去離子水沖洗數(shù)次，確保容器徹底沖洗干凈。溶液中過(guò)高濃度的一價(jià)或二價(jià)陽(yáng)離子會(huì)在某種程度上使Green dead-cell nucleic acid stain的熒光信號(hào)產(chǎn)生衰減。

      1. 對(duì)于貼壁細(xì)胞可以在鋪板時(shí)放入玻片，然后直接在玻片上對(duì)細(xì)胞樣品原位染色；對(duì)于懸浮細(xì)胞，需要對(duì)細(xì)胞懸液離心，然后用緩沖液將細(xì)胞重懸后進(jìn)行染色。哺乳動(dòng)物細(xì)胞等貼壁細(xì)胞可以進(jìn)行爬片原位染色。

      2. 參考附表 1 的濃度加入Green dead-cell nucleic acid stain染色液，若要獲得最佳染色效果，請(qǐng)按附表 1 中的推薦濃度進(jìn)行濃度梯度稀釋染色預(yù)實(shí)驗(yàn)。

      3. 可以使用標(biāo)準(zhǔn)配置濾光片的熒光顯微鏡對(duì)染色結(jié)果進(jìn)行觀察。

      4. 對(duì)真核細(xì)胞進(jìn)行染色時(shí)通?？梢杂^察明亮的細(xì)胞核染色，以及少量的細(xì)胞質(zhì)染色。

      5. 當(dāng)細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)的染料濃度與染色液的濃度基本相同時(shí)，細(xì)菌的染色結(jié)果較為均一。因此，染色時(shí)染液孵育的時(shí)間請(qǐng)不要低于 5 分鐘。

案例分析

      表1 推薦染色條件

注意事項(xiàng)

      為避免反復(fù)凍融，建議適當(dāng)分裝。

      對(duì)于微量的液體，每次使用前先離心數(shù)秒鐘，使液體充分沉降到管底。

      熒光染料均存在淬滅問(wèn)題，請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

      為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。