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      LysoView Blue 是一種溶酶體藍(lán)色熒光探針，是熒光素 pH 指示探針，可以用來(lái)區(qū)分酸性細(xì)胞器，實(shí)現(xiàn)對(duì)溶酶體的特異性標(biāo)記，從而將動(dòng)態(tài)研究活細(xì)胞內(nèi)溶酶體生物合成和功能成為可能。LysoView 在酸性細(xì)胞器內(nèi)富集，可導(dǎo)致其質(zhì)子化，而質(zhì)子化可以減輕染料分子側(cè)鏈上的弱堿性，以減少熒光淬滅，使產(chǎn)生的熒光信號(hào)強(qiáng)度增大。因此，LysoView 表現(xiàn)出 pH 依賴(lài)性，在酸性條件下，熒光信號(hào)強(qiáng)度增加。

      LysoView Blue 可以單獨(dú)或組合使用，檢測(cè)酸化的溶酶體和細(xì)胞內(nèi)溶酶體的功能改變。例如，某些腫瘤細(xì)胞的溶酶體具有較低的 pH 值，而有些腫瘤細(xì)胞則相反。此外，一些細(xì)胞的細(xì)胞器酸化缺陷表現(xiàn)為囊性纖維化合其他病癥。LysoView Blue 熒光探針在此類(lèi)應(yīng)用上具有非常廣泛的意義。

產(chǎn)品參數(shù)

      激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)：370/425nm

      運(yùn)輸條件：常溫

      儲(chǔ)存條件：20℃，避光

      分子式：C24H28N2O2

      分子量：376.50

實(shí)驗(yàn)操作

細(xì)胞制備與染色

      ①打開(kāi)產(chǎn)品包裝前，請(qǐng)先將產(chǎn)品預(yù)熱至室溫，將裝有產(chǎn)品的小管短暫離心，使融有染料的 DMSO 溶液沉積于管底。

      ②LysoView Blue 的最佳工作濃度取決于不同的實(shí)驗(yàn)需求，本實(shí)驗(yàn)操作步驟說(shuō)明僅提供一些初始條件作為參考。具體的染色濃度需要根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型、產(chǎn)品對(duì)細(xì)胞和組織的通透性等因素作相應(yīng)調(diào)整。

      1 用培養(yǎng)基或 PBS 將 1 mg/mL 的 LysoView Blue 原液稀釋?zhuān)ㄗh終濃度至少為 1μM。為了降低由染色液過(guò)量導(dǎo)致的假陽(yáng)性，應(yīng)該盡量使用較低的工作濃度。

      注意：如果細(xì)胞染色后用不含染色液的培養(yǎng)基孵育，會(huì)出現(xiàn)熒光信號(hào)衰減和細(xì)胞起泡的現(xiàn)象。

      2 對(duì)于貼壁細(xì)胞，在干凈的培養(yǎng)皿內(nèi)用蓋玻片讓細(xì)胞爬片至合適的細(xì)胞密度，棄去培養(yǎng)液，加入適量預(yù)熱至 37°C 的染色液，根據(jù)不同類(lèi)型的細(xì)胞在合適的條件下孵育30 分鐘~2 小時(shí)。棄去染色液，加入新鮮的培養(yǎng)基，使用熒光顯微鏡選擇合適的濾光片鏡檢染色結(jié)果。如果細(xì)胞染色不充分，建議提高染色液的濃度或者延遲孵育的時(shí)間。

      3 對(duì)于懸浮細(xì)胞，離心細(xì)胞，棄去上清液；緩慢加入預(yù)熱至 37℃的染色液，根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型選擇合適條件讓細(xì)胞與染色液孵育 30 分鐘~2 小時(shí)；離心細(xì)胞，用預(yù)熱的新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞；用熒光顯微鏡選擇合適的濾光片鏡檢染色結(jié)果。如果細(xì)胞染色不充分，建議提高染色液的濃度或者延遲孵育的時(shí)間。亦可以用 BD Cell-Tak（BDBiosciences）處理懸浮細(xì)胞，讓細(xì)胞吸附于蓋玻片上，然后按貼壁細(xì)胞的方法染色（見(jiàn)步驟 1.2）

案例分析

注意事項(xiàng)

      熒光染料不可避免的存在淬滅問(wèn)題，請(qǐng)存放操作時(shí)注意避光，以減緩熒光的淬滅。

      為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。