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      LysoView Green 是一種溶酶體綠色熒光探針，是熒光素 pH 指示探針，可以用來區(qū)分酸性細胞器，實現(xiàn)對溶酶體的特異性標記，從而將動態(tài)研究活細胞內(nèi)溶酶體生物合成和功能成為可能。LysoView 在酸性細胞器內(nèi)富集，可導(dǎo)致其質(zhì)子化，而質(zhì)子化可以減輕染料分子側(cè)鏈上的弱堿性，以減少熒光淬滅，使產(chǎn)生的熒光信號強度增大。因此，LysoView 表現(xiàn)出 pH 依賴性，在酸性條件下，熒光信號強度增加。

      LysoView Green 可以單獨或組合使用，檢測酸化的溶酶體和細胞內(nèi)溶酶體的功能改變。例如，某些腫瘤細胞的溶酶體具有較低的 pH 值，而有些腫瘤細胞則相反。此外，一些細胞的細胞器酸化缺陷表現(xiàn)為囊性纖維化合其他病癥。LysoView Blue 熒光探針在此類應(yīng)用上具有非常廣泛的意義。

產(chǎn)品參數(shù)

      激發(fā)/發(fā)射波長：443/505nm

      運輸條件：常溫

      儲存條件：20℃，避光

      分子式：C24H22N4O2

      分子量：398.46

細胞制備與染色

細胞制備與染色

      ①打開產(chǎn)品包裝前，請先將產(chǎn)品預(yù)熱至室溫，將裝有產(chǎn)品的小管短暫離心，使融有染料的 DMSO 溶液沉積于管底。

      ②LysoView Blue 的最佳工作濃度取決于不同的實驗需求，本實驗操作步驟說明僅提供一些初始條件作為參考。具體的染色濃度需要根據(jù)細胞類型、產(chǎn)品對細胞和組織的通透性等因素作相應(yīng)調(diào)整。

      1 用培養(yǎng)基或 PBS 將 1 mg/mL 的 LysoView Green 原液稀釋，建議終濃度至少為 1μM。為了降低由染色液過量導(dǎo)致的假陽性，應(yīng)該盡量使用較低的工作濃度。

      注意：如果細胞染色后用不含染色液的培養(yǎng)基孵育，會出現(xiàn)熒光信號衰減和細胞起泡的現(xiàn)象。

      2 對于貼壁細胞，在干凈的培養(yǎng)皿內(nèi)用蓋玻片讓細胞爬片至合適的細胞密度，棄去培養(yǎng)液，加入適量預(yù)熱至 37°C 的染色液，根據(jù)不同類型的細胞在合適的條件下孵育30 分鐘~2 小時。棄去染色液，加入新鮮的培養(yǎng)基，使用熒光顯微鏡選擇合適的濾光片鏡檢染色結(jié)果。如果細胞染色不充分，建議提高染色液的濃度或者延遲孵育的時間。

      3 對于懸浮細胞，離心細胞，棄去上清液；緩慢加入預(yù)熱至 37℃的染色液，根據(jù)細胞類型選擇合適條件讓細胞與染色液孵育 30 分鐘~2 小時；離心細胞，用預(yù)熱的新鮮培養(yǎng)基重懸細胞；用熒光顯微鏡選擇合適的濾光片鏡檢染色結(jié)果。如果細胞染色不充分，建議提高染色液的濃度或者延遲孵育的時間。亦可以用 BD Cell-Tak（BDBiosciences）處理懸浮細胞，讓細胞吸附于蓋玻片上，然后按貼壁細胞的方法染色（見步驟 1.2）

案例分析

注意事項

      熒光染料不可避免的存在淬滅問題，請存放操作時注意避光，以減緩熒光的淬滅。

      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。