国产精品亚洲片在线va_日本香蕉视频ww_午夜大胆性人体_亚洲中文字幕网

      MEQ（MQAE）是一個(gè) 6-甲氧基花青苷衍生物，是細(xì)胞內(nèi)的 Cl-熒光指示劑，該染料可以通過受被動(dòng)擴(kuò)散所控制的碰撞淬滅來檢測離子濃度。目前，檢測 Cl-所用熒光染料主要是 MQAE 和 SPQ，MQAE 相比 SPQ 來說對(duì)于 Cl-的濃度有更高的靈敏度和更高的熒光量子比率。

細(xì)胞內(nèi) Cl-的測量

      MQAE 的工作液可以配制于 Krebs-HEPES 緩沖液中。Krebs-HEPES 緩沖液即為 20mM HEPES，128mM NaCl，2.5mM KCl，2.7mM CaCl2，1mM MgCl2，16mM glucose，pH7.4。MQAE 標(biāo)記細(xì)胞時(shí)的濃度通常為 5-10mM。以約 800-1000 萬細(xì)胞每毫升的細(xì)胞密度，在含有 5-10mM MQAE 的 Krebs-HEPES 緩沖液中孵育 30-60 分鐘。通常一個(gè)探針的裝載體系為 100 微升即可。隨后用 Krebs-HEPES緩沖液或其它適當(dāng)溶液洗滌 5 次左右，即可進(jìn)行相應(yīng)熒光測定。詳細(xì)的使用方法請(qǐng)參考相關(guān)文獻(xiàn)。

      以下對(duì)胞內(nèi)氯離子的熒光測量[Cl-]做簡要說明計(jì)算。Stem-Volmer 方程可以給出氯離子探針的熒光強(qiáng)度與氯離子濃度的關(guān)系：(F_O/F) – 1 = Ksv[Q]

      F_O 是沒有鹵化物或其他淬滅離子時(shí)的熒光強(qiáng)度，F(xiàn) 是有淬滅劑時(shí)的熒光強(qiáng)度，[Q]是淬滅劑濃度，而 Ksv是 Stem-Volmer 方程常數(shù)。建議對(duì)實(shí)驗(yàn)體系進(jìn)行校準(zhǔn)，以得到研究用細(xì)胞類型的指示劑探針的 Ksv，利用線性回歸模型分析 Stem-Volmer 方程。

      Stem-Volmer 方程中的氯離子 Ksv 常數(shù)可以隨著碰撞淬滅的陰離子物質(zhì)的增多而明顯降低，如多肽。便于校準(zhǔn)，可以固定胞內(nèi)氯離子的濃度，通過使用雙三丁基氧化錫和尼日利亞菌素 10~30μM。為了保證滲透壓最好使用陰離子不淬滅染料，取代氯離子，如葡萄糖酸。