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      LysoView Red 是一種溶酶體熒光探針，是熒光素 pH 指示探針，可以用來區(qū)分酸性細(xì)胞器，實(shí)現(xiàn)對溶酶體的特異性標(biāo)記，從而將動態(tài)研究活細(xì)胞內(nèi)溶酶體生物合成和功能成為可能。

      LysoView在酸性細(xì)胞器內(nèi)富集，可導(dǎo)致其質(zhì)子化，而質(zhì)子化可以減輕染料分子側(cè)鏈上的弱堿性，以減少熒光淬滅，使產(chǎn)生的熒光信號強(qiáng)度增大。因此，LysoView表現(xiàn)出 pH 依賴性，在酸性條件下，熒光信號強(qiáng)度增加。

      LysoView Red 可以單獨(dú)或組合使用，檢測酸化的溶酶體和細(xì)胞內(nèi)溶酶體的功能改變。例如，某些腫瘤細(xì)胞的溶酶體具有較低的 pH 值，而有些腫瘤細(xì)胞則相反。此外，一些細(xì)胞的細(xì)胞器酸化缺陷表現(xiàn)為囊性纖維化和其他病癥。LysoView熒光探針在此類應(yīng)用上具有非常廣泛的意義。

產(chǎn)品參數(shù)

      激發(fā)/發(fā)射波長：577/590nm

      運(yùn)輸條件：4℃運(yùn)輸

      儲存條件：20℃，避光

      分子式：C20H24BF2N5O

      分子量：399.25

實(shí)驗(yàn)步驟

      ①打開產(chǎn)品包裝前，請先將產(chǎn)品預(yù)熱至室溫，將裝有產(chǎn)品的小管短暫離心，使融有染料的 DMSO 溶液沉積于管底。最佳工作濃度取決于不同的實(shí)驗(yàn)需求，本實(shí)驗(yàn)操作步驟說明僅提供一些初始條件作為參考。具體的染色濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型、產(chǎn)品對細(xì)胞和組織的通透性等因素作相應(yīng)調(diào)整。

      ②用培養(yǎng)基或 PBS 原液稀釋，建議終濃度至少為 1μM。為了降低由染色液過量導(dǎo)致的假陽性，應(yīng)該盡量使用較低的工作濃度。

      ③如果細(xì)胞染色后用不含染色液的培養(yǎng)基孵育，會出現(xiàn)熒光信號衰減和細(xì)胞起泡的現(xiàn)象。

      貼壁細(xì)胞：在干凈的培養(yǎng)皿內(nèi)用蓋玻片讓細(xì)胞爬片至合適的細(xì)胞密度，棄去培養(yǎng)液，加入適量預(yù)熱至 37°C 的染色液，根據(jù)不同類型的細(xì)胞在合適的條件下孵育30 分鐘~2 小時。棄去染色液，加入新鮮的培養(yǎng)基，使用熒光顯微鏡選擇合適的濾光片鏡檢染色結(jié)果。如果細(xì)胞染色不充分，建議提高染色液的濃度或者延遲孵育的時間。

      懸浮細(xì)胞：離心細(xì)胞，棄去上清液；緩慢加入預(yù)熱至 37℃的染色液，根據(jù)細(xì)胞類型選擇合適條件讓細(xì)胞與染色液孵育 30 分鐘~2 小時；離心細(xì)胞，用預(yù)熱的新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞；用熒光顯微鏡選擇合適的濾光片鏡檢染色結(jié)果。如果細(xì)胞染色不充分，建議提高染色液的濃度或者延遲孵育的時間。

案例分析

注意事項(xiàng)

      1. 如果染色效果欠佳，可以提高染色工作液中探針的濃度，或在推薦的時間范圍內(nèi)適當(dāng)延長染色時間。

      2. 為了降低染色背景，盡可能的使用較低濃度的染料。

      3. 注意拍照要迅速，因?yàn)槿玖想S著拍照時間的增加易淬滅。