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      MTT全稱為3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide (Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide)，中文名簡稱：噻唑藍(lán)。分子式為C18H16BrN5S，分子量為414.32。

      MTT常用于檢測細(xì)胞毒性和細(xì)胞增殖，其檢測原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，死細(xì)胞無此顯色反應(yīng)。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲臜，用酶標(biāo)儀測定其光吸收值，在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶甲臜形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。

      傳統(tǒng)MTT檢測方法中，由于產(chǎn)生的甲臜是不溶于水的，需要先將上層含MTT底物的反應(yīng)液移除，再加入DMSO溶解甲臜，此步操作容易造成實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性、可現(xiàn)性較差。本試劑盒提供特殊的甲臜溶解劑，檢測時(shí)無需移除原有的含MTT底物反應(yīng)液，而是直接加入甲臜溶解劑，即可溶解甲臜，從而避免移除原有反應(yīng)液導(dǎo)致的誤差。

儲(chǔ)存與運(yùn)輸

      冰袋（wet ice）運(yùn)輸；MTT溶液，-20℃避光保存；甲臜溶解劑，4°避光保存；有效期12個(gè)月。

使用說明

      1. 對于細(xì)胞增殖檢測，每孔建議種板100 μL 2000個(gè)細(xì)胞；對于細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)，每孔建議種板100 μL 5000個(gè)細(xì)胞（具體視細(xì)胞大小、增殖速度調(diào)整）。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染或給藥預(yù)處理；

      2. 每孔加入10 μL MTT溶液，置于培養(yǎng)箱中孵育4 h；

      3. 向孔板內(nèi)加入100 uL甲臜溶解劑，輕敲孔板使其混勻，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育2-4 h，使甲臜溶解（孵育時(shí)間視細(xì)胞數(shù)量調(diào)整，可在顯微鏡下觀察待甲臜溶解即可檢測）；

      4. 在570 nm處測量各孔的吸光值。如無570 nm濾光片，可以使用560-600 nm濾光片。

注意事項(xiàng)

      1. 使用96孔板進(jìn)行檢測，如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長，一定要注意蒸發(fā)的問題。96孔板周圍一圈最容易蒸發(fā)，可以采取棄用周圍一圈的辦法，改加PBS，水或培養(yǎng)液；也可以通過把96孔板置于靠近培養(yǎng)箱內(nèi)水源的地方來緩解蒸發(fā)。

      2. 為減少實(shí)驗(yàn)操作導(dǎo)致的誤差，建議設(shè)置復(fù)孔，在加樣或者震蕩混合時(shí)，避免產(chǎn)生氣泡。

      3. MTT溶液為黃色，使用前需避光室溫放置或20-25℃水浴片刻至全部融解后使用。長時(shí)間光照會(huì)導(dǎo)致失效，如果溶液呈灰綠色，請勿使用。

      4. 甲臜溶解劑如果有沉淀析出，可以室溫或37℃水浴以促進(jìn)溶解，待溶解混勻后再使用。

      5. 為了您的健康和安全，操作時(shí)請穿實(shí)驗(yàn)服，并佩戴一次性手套。