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      本試劑盒適用于從培養(yǎng)的細(xì)菌中提取各種無內(nèi)毒素的質(zhì)粒DNA。試劑盒采用獨(dú)特的硅膠膜吸附技術(shù)以及搭配去內(nèi)毒素溶液Buffer ER和Buffer ED，可得到濃度在500-1800 μg的高純度質(zhì)粒DNA，并有效地去除內(nèi)毒素。使用本試劑盒提取的質(zhì)粒DNA可應(yīng)用于酶切反應(yīng)、連接反應(yīng)、PCR擴(kuò)增、測序、轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)染多種細(xì)胞等生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

      RNase A冰袋（wet ice）運(yùn)輸，-20℃保存；其余試劑室溫運(yùn)輸，室溫儲存；有效期12個月。

1. 自備無水乙醇和50 mL Nuclease-free的離心管。

2. 使用前先將RNase A全部加入Buffer P1中，并于4℃可保存6個月。

3. Buffer PW使用前加入163 mL的無水乙醇。

4. Buffer P2如出現(xiàn)沉淀，請于37℃水浴中加熱幾分鐘即可恢復(fù)澄清，使用后應(yīng)立即蓋緊蓋子，避免試劑長時間與空氣接觸。

5. Buffer P3使用前請于4℃預(yù)冷。

1. 柱平衡步驟：向HiBind DNA Column中（HiBind DNA Column提前放入50 mL Collection Tube中）加入2.5 mL Buffer BL，8000 rpm（～8228×g）室溫離心2 min，棄掉廢液，將HiBind DNA Column重新放回Collection Tube中（處理過的柱子最好立即使用）；

2. 取100 mL過夜培養(yǎng)菌液（對于低拷貝質(zhì)粒建議取200 mL過夜培養(yǎng)菌液），8000 rpm（～8228×g）室溫離心3 min收集菌體于50 mL離心管中（盡量將上清全部去除）；

3. 加入8 mL Buffer P1（請先檢查是否加入RNase A），使用移液器或渦旋振蕩器徹底懸浮菌體（務(wù)必使菌體徹底分散，否則會影響裂解，導(dǎo)致提取質(zhì)粒的質(zhì)量和純度偏低）；

4. 加入8 mL Buffer P2立即溫和的上下顛倒8-10次使菌體充分裂解（此步不可劇烈震蕩，并且應(yīng)保證在5 min以內(nèi)完成），此時溶液應(yīng)變得清亮粘稠，如果未變得清亮可能是菌體過多，再重新顛倒幾次直到溶液透明；

5. 加入8 mL Buffer P3（提前4℃預(yù)冷）立即溫和的上下顛倒10-12次，溶液出現(xiàn)緊實(shí)凝集塊，冰上放置5 min，8000 rpm（～8228×g）4℃離心15 min，將上清慢慢地全部倒入Column Filter中，推動推柄過濾，濾液收集于Nuclease-free的50 mL離心管（自備）中；

6. 加入2.4 mL Buffer ER，顛倒混勻后冰上放置10 min（期間顛倒混勻3-5次），溶液呈透明藍(lán)色；

7. 加入0.5倍上述溶液體積的無水乙醇，上下顛倒混勻后轉(zhuǎn)移到HiBind DNA Column中（每次加入液體量不超過10 mL）；

8. 室溫8000 rpm（～8228×g）室溫離心2 min，棄掉HiBind DNA Column中的廢液，將HiBind DNA Column重新放回Collection Tube中（第七步的溶液可進(jìn)行多次過柱）；

9. 向吸附柱中加入10 mL Buffer ED 8000 rpm（～8228×g）室溫離心2 min，棄掉HiBind DNA Column中的廢液，將HiBind DNA Column重新放回Collection Tube中；

10. 向HiBind DNA Column中加入10 mL Buffer PW 8000 rpm（～8228×g）室溫離心2 min，棄掉收集管中的廢液，將HiBind DNA Column重新放回Collection Tube中；

11. 重復(fù)操作步驟10；

12. 8000 rpm（～8228×g）室溫離心5 min，然后將HiBind DNA Column開蓋室溫放置10 min，使乙醇徹底揮發(fā)；

13. 將HiBind DNA Column置于新的50 mL Collection Tube中，向吸附膜的中間部位懸空滴加1-2 mL Buffer TE，室溫放置5 min，8000 rpm（～8228×g）離心5 min。如果需要增加質(zhì)粒的回收效率，可將得到的溶液重新加入到HiBind DNA Column中，室溫放置5 min后，8000 rpm（～8228×g）離心5 min；

14. 將50 mL Collection Tube中的洗脫液全部移到一個Nuclease-free的1.5 mL離心管中，－20℃保存。

1. 操作之前，請務(wù)必認(rèn)真閱讀本產(chǎn)品說明書。

2. 使用Column Filter過濾時請勿加入過多沉淀，以免堵住過濾器。

3. 提取的質(zhì)粒DNA大于10 kb時，應(yīng)增加菌體收集量。

4. 洗脫質(zhì)粒前應(yīng)使乙醇完全揮發(fā)，避免殘留的乙醇影響下游實(shí)驗(yàn)

5. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。