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      本試劑盒適用于福爾馬林固定、石蠟包埋組織（FFPE）的基因組DNA提取，并采用了特殊的脫蠟試劑，不含二甲苯等有機溶劑，安全無毒、可有效地去除石蠟并釋放出組織樣本。本試劑盒利用特殊的裂解緩沖液再結合離心柱法能快速有效地提取石蠟包埋組織基因組DNA，提取過程可在1 h內(nèi)完成，DNA得率大，純度高，適用于多種下游應用，如PCR、Real-Time PCR、SNP基因分型等多種分子生物學實驗。

      RNase A和Proteinase K冰袋（wet ice）運輸，-20℃保存；其它試劑室溫運輸及儲存，有效期12個月。

1. 提前準備好80℃、56℃和90℃的水浴或金屬浴。

2. 如果Buffer GL和Buffer GB出現(xiàn)沉淀，請于65℃加熱溶解，待恢復至室溫后使用。

3. 使用前請向Buffer GP中加入21 mL無水乙醇，Buffer PW中加入56 mL無水乙醇，混合均勻后使用。

1. 樣本處理

石蠟切片：取石蠟切片（1×1 cm2大?。?-8張，用滅菌手術刀刮取并收集組織碎片，置于1.5 mL離心管中。

石蠟包埋的組織塊：用滅菌手術刀刮取約30 mg的組織樣本，盡量去除多余的石蠟并切碎樣本。

福爾馬林浸泡的組織：用濾紙吸干凈組織表面的液體，取約30 mg樣本切碎并置于1.5 mL離心管中，加入500 μL PBS緩沖液（pH7.4），渦旋振蕩10 s后12,000 rpm室溫離心1 min，棄上清，重復3次。

2. 將樣本轉(zhuǎn)移至1.5 mL離心管中，加入500 μL Buffer DP，80℃孵育3 min，趁熱渦旋振蕩10 s；

3. 向離心管中加入200 μL Buffer GL，渦旋振蕩混勻，12,000 rpm室溫離心1 min，溶液形成上下兩層（上層為油相，下層為水相）；

4. 于下層水相中加入20 μL Proteinase K和10 μL RNase A，使用移液器輕輕吹打混勻（盡量不要破壞分層），56℃孵育20 min；

5. 隨后將離心管轉(zhuǎn)移至90℃孵育10 min（若未消化完全的組織塊較多，可適當延長孵育時間至20 min），冷卻至室溫；

6. 向上一步的樣本中加入200 μL Buffer GB和200 μL無水乙醇，渦旋振蕩混勻；

7. 12,000 rpm室溫離心1 min，溶液形成上下兩層（上層為油相，下層為水相）；

8. 取下層水相溶液至DNA Spin Column中（不要取到上層油相溶液和其他雜質(zhì)），12,000 rpm室溫離心2 min，棄濾液；

9. 向DNA Spin Column中加入500 μL Buffer GP，12,000 rpm室溫離心1 min，棄濾液；

10. 向DNA Spin Column中加入600 μL Buffer PW（請沿管壁加入Buffer PW，有助于沖洗管壁上殘留的鹽分），12,000 rpm室溫離心1 min，棄濾液；

11. 重復步驟10；

12. 將DNA Spin Column置于收集管上，12,000 rpm室溫離心2 min，取出DNA Spin Column置于新的1.5 mL離心管上；

13. 將DNA Spin Column開蓋室溫放置3-5 min，盡量去除乙醇殘留；

14. 向DNA Spin Column的膜中央懸空加入50-100 μL 65℃預熱的Buffer TE或Nuclease-free Water，室溫靜置5 min，12000 rpm離心2 min，收集DNA溶液。若想要得到更高濃度的DNA，也可以將第一次的洗脫液重新加回至DNA Spin Column中，室溫靜置5 min，12000 rpm離心2 min，再次洗脫DNA。

1. 操作之前，請務必認真閱讀本產(chǎn)品說明書。

2. 本試劑盒提取DNA的得率和完整性依賴于樣本種類，固定時間、固定條件以及樣本儲存時間等。固定時間最好在8-24 h以內(nèi)，如果樣本存放時間超過1年或者固定時間超過24小時，則會導致DNA碎片化過多，而無法擴增出目的條帶。

3. 樣本包埋前需完全脫水，以防止殘留的福爾馬林對后續(xù)實驗造成影響。

4. 包埋組織取樣時應盡量去除多余的石蠟并切碎樣本，且取樣量不要超過30 mg，否則易造成裂解不充分的情況，影響核酸得率。

提取的基因組DNA作為PCR擴增模板時，建議先做模板梯度測試，選擇最佳模板濃度進行擴增。

操作時請穿實驗服，并佩戴一次性手套。