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      本試劑盒通過特別優(yōu)化的細菌裂解緩沖體系，再搭配專一結(jié)合DNA的離心吸附柱，可快速提取與純化細菌基因組DNA。本試劑盒適用于各種革蘭氏陰性菌基因組DNA的提取，以及采用溶菌酶與裂解緩沖體系結(jié)合的方法，可提取大部分革蘭氏陽性菌的基因組DNA。獲得的基因組DNA具有高純度和高完整度的特性，可直接用于后續(xù)PCR擴增、Southern雜交、文庫構(gòu)建等多種分子生物學實驗。

      Lysozyme，Proteinase K，RNase A冰袋（wet ice）運輸，-20℃保存；其余試劑室溫運輸，室溫儲存；有效期12個月。

1. Buffer BGL1如有沉淀現(xiàn)象，請于65℃加熱溶解，待恢復至室溫后使用。

2. 使用前請向Buffer BPD中加入18 mL無水乙醇，向Buffer PW中加入56 mL無水乙醇。

1. 取1-5 mL過夜培養(yǎng)的新鮮菌液加入1.5 mL離心管中，12,000 rpm離心1 min，盡量吸除上清（菌液較多時可以通過多次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中）。注意：對于革蘭氏陽性菌，收集完菌體后需加入溶菌酶溶液進行破壁處理，具體方法為：加入130 μL Lysozyme Buffer，50 μL Lysozyme，渦旋振蕩至菌體徹底懸浮，37℃水浴60 min，每10 min顛倒混勻一次；

2. 向離心管中加入200 μL Buffer BGL1，渦旋振蕩混勻；

3. 向離心管中加入20 μL Proteinase K和10 μL RNase A，使用移液器吹打或渦旋振蕩混勻后于56℃孵育20 min，此時溶液呈現(xiàn)透明狀（如果此時溶液未透明，應延長反應時間至30 min，每10 min用移液器吹打混勻一次）；

4. 向離心管中加入200 μL Buffer BGL2和200 μL無水乙醇，上下顛倒混勻，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀；

5. 將DNA Spin Column安置于Collection Tube上，并將上述混合液轉(zhuǎn)移至DNA Spin Column中；

6. 12,000 rpm離心30 s，棄掉廢液，將DNA Spin Column重新放回Collection Tube中；

7. 向DNA Spin Column中加入500 μL Buffer BPD，12,000 rpm離心30 s，棄掉廢液；

8. 向DNA Spin Column中加入600 μL Buffer PW（請沿管壁加入Buffer PW，有助于沖洗管壁上殘留的鹽分），12,000 rpm離心30 s，棄掉廢液；

9. 重復操作步驟8；

10. 將DNA Spin Column放入Collection Tube中，12,000 rpm離心2 min，盡量除去殘留的液體；

11. 將DNA Spin Column置于一新的1.5 mL的離心管中，室溫放置5-10 min，使DNA Spin Column殘留的乙醇完全揮發(fā)；

12. 向DNA Spin Column的膜中央加入50-100 μL Buffer TE或Nuclease-free Water，室溫放置5 min（將Buffer TE或Nuclease-free Water加熱至65℃有利于提高洗脫效率）；

13. 12,000 rpm離心2 min，收集DNA。若要得到更高濃度的DNA，也可以將第一次的洗脫液重新加回至DNA Spin Column中，室溫靜置5 min，12,000 rpm離心2 min，再次收集DNA。

1. 操作之前，請務必認真閱讀本產(chǎn)品說明書。

2. 應盡量使用新鮮的菌體，以確保提取得到的基因組DNA的得率與完整性。

3. 提取的菌體起始量切勿太多，且要充分裂解，否則可能影響基因組DNA的得率與純度。

4. 操作時請穿實驗服，并佩戴一次性手套。