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      本試劑盒采用獨特的吸附柱，既能從TAE或TBE瓊脂糖凝膠中回收DNA片段，又能用于直接純化PCR產(chǎn)物，滿足多種實驗需要。Buffer GL中含有pH指示劑，可根據(jù)顏色來判斷溶膠或PCR產(chǎn)物回收是否達(dá)到最佳狀態(tài)。使用本產(chǎn)品可回收100 bp-10 kb大小的DNA片段，回收率可達(dá)85%。每個吸附柱每次可吸附的DNA量為20 μg。使用本試劑盒回收的DNA可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、測序、文庫篩選、連接和轉(zhuǎn)化等實驗。

      常溫運輸；常溫干燥處保存，有效期12個月。

1. （可選步驟）柱平衡：將吸附柱（Bind DNA Mini Columns）置入收集管（Collection Tubes）中，向吸附柱中加入500 μL溶液Buffer BL，10,000 g離心1 min，去除收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中（請使用當(dāng)天處理過的柱子）；

2. 用干凈刀片將單一目的DNA條帶從瓊脂糖凝膠中切下（盡量切除多余部分）放入干凈的離心管中，稱取重量；

3. 向膠塊中加入等倍體積溶液Buffer GL（如凝膠重為0.1 g，其體積可視為100 μL，則加入100 μL溶液Buffer GL，60℃水浴至膠塊完全溶解（其間不斷溫和地上下翻轉(zhuǎn)離心管，以確保膠塊充分溶解，若膠塊的體積過大，可事先將膠塊切成碎塊）（注意：若是對于回收產(chǎn)量要求高，可在加入Buffer GL完全溶膠后再加入1/2膠塊體積的異丙醇以提高回收率；膠塊完全溶解后最好將溶液溫度降至室溫再上柱，因為吸附柱在室溫時結(jié)合DNA的能力較強(qiáng)。凝膠完全融解后應(yīng)呈現(xiàn)淡黃色，即可進(jìn)行后續(xù)操作。如果膠完全融解后溶液的顏色為紫色或紅色，請使用10 μL 3M乙酸鈉（pH 5.0）將溶液的顏色調(diào)為淡黃色后再進(jìn)行后續(xù)操作）；

4. 將上一步所得溶液全部轉(zhuǎn)入吸附柱中（吸附柱放入收集管中），10,000 g離心1 min，棄去收集管中廢液，將吸附柱放入收集管中（注意：吸附柱容積為800 μL，若樣品體積大于800 μL可分批加入）；

5. 向吸附柱中加入700 μL溶液Buffer PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），10,000 g離心1 min，棄去收集管中廢液，將吸附柱放入收集管中（注意：如果回收的DNA是用于鹽敏感的實驗，例如平末端連接實驗或直接測序，建議Buffer PW加入后靜置2-5 min再離心）；

6. 重復(fù)操作步驟5；

7. 將吸附柱放入收集管中，10,000 g離心2 min，盡量除去殘留液體。將吸附柱置于室溫放置5 min，徹底晾干（注意：漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)酶切、PCR等實驗）；

8. 將吸附柱放入一個干凈離心管中，向吸附膜中間位置懸空滴加30~50 μL Elution Buffer或ddH2O（Elution Buffer或ddH2O 60-65℃預(yù)熱效果更好），室溫放置2 min，然后10,000 g離心2 min，收集DNA溶液（注意：洗脫液的體積不應(yīng)少于30 μL，體積過少會影響回收的效率。洗脫液的pH值對于洗脫效率有較大影響。若后續(xù)做測序，需使用ddH2O做洗脫液，并保證其pH值在7.0-8.5范圍內(nèi)，pH值低于7.0會降低洗脫效率；且DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防DNA降解。為了提高DNA的回收量，可將離心得到的溶液重新加回離心吸附柱中，室溫放置2 min，10,000 g離心2 min，將DNA溶液收集到離心管中）。

二、從PCR反應(yīng)液或酶切反應(yīng)液中回收DNA片段

1. （可選步驟）柱平衡：將吸附柱（Bind DNA Mini Columns）置入收集管（Collection Tubes）中，然后在吸附柱中加入500 μL溶液Buffer BL，10,000 g離心1 min，去除收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中(請使用當(dāng)天處理過的柱子)；

2. 預(yù)估PCR反應(yīng)液或酶切反應(yīng)液的體積，向其中加入3倍體積的溶液Buffer GL（加入Buffer GL不少于150 μL），充分混勻（無需去除石蠟油或礦物油）（注意：若是對于回收產(chǎn)量要求高，可在加入Buffer GL后再加入3/4 PCR反應(yīng)液或酶切反應(yīng)液的體積的異丙醇以提高回收率；混合后溶液應(yīng)呈現(xiàn)淡黃色，即可進(jìn)行后續(xù)操作。如果膠完全融解后溶液的顏色為紫色或紅色，請使用10 μL 3M乙酸鈉（pH 5.0）將溶液的顏色調(diào)為淡黃色后再進(jìn)行后續(xù)操作）；

3. 將上一步所得溶液全部轉(zhuǎn)入吸附柱中（吸附柱放入收集管中），10,000 g離心1 min，棄去收集管中廢液，將吸附柱放入收集管中（注意：吸附柱容積為800 μL，若樣品體積大于800 μL可分批加入）；

4. 向吸附柱中加入700 μL溶液Buffer PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），10,000 g離心1 min，棄去收集管中廢液，將吸附柱放入收集管中（注意：如回收DNA是用于鹽敏感實驗，例如平末端連接實驗或直接測序，建議Buffer PW加入后靜置2-5 min再離心）；

5. 重復(fù)操作步驟4；

6. 將吸附柱放入收集管中，10,000 g離心2 min，盡量除去殘留液體。將吸附柱置于室溫放置5 min，徹底晾干（注意：漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)酶切、PCR等實驗）；

7. 將吸附柱放入一個干凈離心管中，向吸附膜中間位置懸空滴加30~50 μL Elution Buffer或ddH2O（Elution Buffer或ddH2O 60-65℃預(yù)熱效果更好），室溫放置2 min，然后10,000 g離心2 min，收集DNA溶液（注意：洗脫液的體積不應(yīng)少于30 μL，體積過少會影響回收的效率。洗脫液的pH值對于洗脫效率有較大影響。若后續(xù)做測序，需使用ddH2O做洗脫液，并保證其pH值在7.0-8.5范圍內(nèi)，pH值低于7.0會降低洗脫效率；且DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防DNA降解。為了提高DNA的回收量，可將離心得到的溶液重新加回離心吸附柱中，室溫放置2 min，10,000 g離心2 min，將DNA溶液收集到離心管中）。

1. 溶液Buffer BL的加入能夠改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和穩(wěn)定性，消除高溫/潮濕或其他不良環(huán)境因素對吸附柱造成的影響，柱平衡步驟也可省略。

2. 使用前請先檢查Buffer PW是否加入指定量的無水乙醇。

3. 各溶液使用后請及時將蓋子擰緊。