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      本試劑盒通過特別優(yōu)化的細(xì)菌裂解緩沖體系，可快速釋放細(xì)菌基因組DNA，再結(jié)合本公司專門針對核酸提取研發(fā)的超順磁性磁珠，在結(jié)合液的作用下選擇性吸附裂解液中的基因組DNA，通過漂洗液的清洗除去磁珠吸附的少量雜質(zhì)，在洗脫液的作用下釋放吸附的基因組DNA。本試劑盒適用于各種革蘭氏陰性菌和大部分革蘭氏陽性菌。獲得的高純度、高完整度的基因組DNA可直接用于后續(xù)PCR擴增、Southern雜交、文庫構(gòu)建等多種分子生物學(xué)實驗。

儲存與運輸

      Lysozyme，Proteinase K，RNase A冰袋（wet ice）運輸，-20℃保存；其余試劑室溫運輸，室溫儲存；有效期12個月。

使用前準(zhǔn)備

1. Buffer MB1如有沉淀現(xiàn)象，請于65℃加熱溶解，待恢復(fù)至室溫后使用。

2. 使用前請向Buffer MBP中加入18 mL無水乙醇，向Buffer PW中加入56 mL無水乙醇。

3. 自備磁力架。

實驗步驟

1. 取1-5 mL過夜培養(yǎng)的新鮮菌液于1.5 mL離心管中，12,000 rpm離心1 min，盡量吸除上清。注意：對于革蘭氏陽性菌，收集完菌體后需加入溶菌酶溶液進(jìn)行破壁處理，具體方法為：加入130 μL Lysozyme Buffer和20 μL Lysozyme，渦旋振蕩至菌體徹底懸浮，37℃水浴60 min，每10 min顛倒混勻一次；

2. 向離心管中加入200 μL Buffer MB1，渦旋振蕩混勻；

3. 向離心管中加入20 μL Proteinase K和10 μL RNase A，使用移液器吹打或渦旋振蕩混勻后于56℃孵育20 min，此時溶液呈現(xiàn)透明狀（如果此時溶液未透明，應(yīng)延長反應(yīng)時間至30 min，每10 min混勻一次）；

4. 向離心管中加入200 μL Buffer MB2和200 μL無水乙醇，上下顛倒混勻，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀；

5. 向離心管中加入20 μL SweMag Beads（SweMag Beads使用前需充分振蕩至分散均勻），使用移液器吹打至磁珠分散均勻；

6. 室溫靜置10 min，放置過程中，使用移液器吹打混勻數(shù)次，保持磁珠處于懸浮狀態(tài)；

7. 將離心管移至磁力架上靜置30 s，待上清清澈后，吸棄上清；

8. 加入500 μL Buffer MBP，移開磁力架，使用移液器吹打至磁珠分散均勻，將離心管移至磁力架上靜置30 s，待上清清澈后，吸棄上清；

9. 加入600 μL Buffer PW，移開磁力架，使用移液器吹打至磁珠分散均勻，將離心管移至磁力架上靜置30 s，待上清清澈后，吸棄上清；

10. 重復(fù)步驟9；

11. 將離心管蓋打開，室溫放置5-10 min，使乙醇完全揮發(fā)（避免磁珠過度干燥，以免影響核酸得率）；

12. 移去磁力架，向離心管中加入50-100 μL Buffer TE或Nuclease-free Water，使用移液器輕輕吹打至磁珠分散均勻，室溫靜置5 min；

13. 將離心管置于磁力架上，直至磁珠完全吸附，吸取上清至Nuclease-free離心管中，即得高純度的基因組DNA。

注意事項

1. 操作之前，請務(wù)必認(rèn)真閱讀本產(chǎn)品說明書。

2. 應(yīng)盡量使用新鮮的菌體，以確保提取得到的基因組DNA的得率與完整性。

3. 提取的菌體起始量切勿太多，且要充分裂解，否則可能影響基因組DNA的得率與純度。

4. 磁珠懸液在保存過程中應(yīng)避免冷凍。

5. 磁珠易沉降，使用前應(yīng)充分振蕩使其保持均勻懸浮狀態(tài)。

6. 向樣本中加入磁珠前，需要將樣本中的試劑混合均勻。

7. 請勿長時間干燥磁珠，以免影響DNA洗脫效率。