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      表觀遺傳學(xué)是研究在基因的核苷酸序列不發(fā)生改變的情況下，基因的表達(dá)和調(diào)控的可遺傳變化的一門遺傳學(xué)分支學(xué)科。其中DNA甲基化是被最早發(fā)現(xiàn)，也是研究最為深入的表觀遺傳調(diào)控機(jī)制之一。在許多動(dòng)植物中，DNA甲基化是以S-腺苷甲硫氨酸為甲基供體，在甲基轉(zhuǎn)移酶的催化下，胞嘧啶嘧啶環(huán)的第五個(gè)碳位置共價(jià)結(jié)合一個(gè)甲基基團(tuán)。

      在原核生物和真核生物中DNA甲基化是一種自然發(fā)生的事件。在原核生物中，DNA甲基化可保護(hù)宿主DNA不被限制性內(nèi)切酶消化，而這些限制性內(nèi)切酶可以消除外源DNA；在高等真核生物中，DNA甲基化在基因表達(dá)的調(diào)控中發(fā)揮重要作用。

      本產(chǎn)品是利用亞硫酸氫鹽處理甲基化的DNA，將未甲基化的胞嘧啶轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不變，整個(gè)過程可在4 h內(nèi)完成，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)99%以上。同時(shí)本產(chǎn)品采用于磁珠上脫硫并回收DNA的方法，有效提高轉(zhuǎn)化后的DNA的回收量，整個(gè)操作流程極為簡(jiǎn)便。經(jīng)轉(zhuǎn)化后的DNA可用于PCR擴(kuò)增和下游分析實(shí)驗(yàn)，包括限制性內(nèi)切酶酶切、測(cè)序、微陣列等。

儲(chǔ)存與運(yùn)輸

      室溫運(yùn)輸及儲(chǔ)存；有效期12個(gè)月。

使用前準(zhǔn)備

1. CT Conversion Reagent使用前先加入280 μL Buffer BM和910 μL Nuclease-free Water，渦旋至溶解，-20℃保存。

2. 使用前請(qǐng)向Buffer DB加入8.4 mL無水乙醇，Buffer PW加入56 mL無水乙醇，混勻后使用。

3. 自備磁力架，異丙醇。

操作步驟

1. 取20 μL基因組DNA（總量為500 ng-2000 ng，如果體積不足20 μL可用Nuclease-free Water補(bǔ)足）置于PCR管內(nèi)，加入130 μL CT Conversion Reagent，使用移液器輕輕吹打混勻；

2. 將第一步的混合物轉(zhuǎn)移至PCR儀中，設(shè)置98℃ 10 min，64℃ 2.5 h，運(yùn)行結(jié)束后產(chǎn)物置于4℃保存；

3. 向上述產(chǎn)物中加入150 μL Buffer GB和130 μL異丙醇，使用移液器吹打混勻，再加入15 μL SweMag Beads（SweMag Beads使用前需渦旋至分散均勻），使用移液器吹打至磁珠分散均勻；

4. 室溫放置10 min，期間使用移液器吹打混勻3-4次，使磁珠保持分散均勻狀態(tài)；

5. 將離心管移至磁力架上靜置30 s，使磁珠吸附至管壁，待上清清澈后，吸棄上清（為避免影響提取效率，勿將磁珠吸出）；

6. 將離心管從磁力架上取下，向離心管中加入400 μL Buffer PW，使用移液器吹打至磁珠分散均勻，再將離心管移至磁力架上靜置30 s，使磁珠吸附到管壁，待上清清澈后，吸棄上清（為避免影響提取效率，勿將磁珠吸出）；

7. 將離心管從磁力架上取下，向離心管中加入200 μL Buffer DB，使用移液器吹打至磁珠分散均勻，室溫放置15 min，期間每隔3-5 min吹打混勻一次（Buffer DB處理時(shí)間不應(yīng)過長(zhǎng)，以免造成基因組DNA過度碎片化），將離心管移至磁力架上靜置30 s，使磁珠吸附到管壁，待上清清澈后，吸棄上清（為避免影響提取效率，勿將磁珠吸出）；

8. 將離心管從磁力架上取下，向離心管中加入400 μL Buffer PW，使用移液器吹打至磁珠分散均勻，再將離心管移至磁力架上靜置30 s，使磁珠吸附到管壁，待上清清澈后，吸棄上清（為避免影響提取效率，勿將磁珠吸出）；

9. 重復(fù)步驟8；

10. 將離心管蓋打開，室溫放置5–10 min或65℃放置3–5 min，使乙醇完全揮發(fā)（請(qǐng)勿使磁珠過度干燥，以免影響核酸得率）；

11. 將離心管從磁力架上取下，向離心管中加入30-50 μL Nuclease-free Water，使用移液槍將磁珠吹打至磁珠分散均勻，室溫靜置5 min；

12. 將離心管置于磁力架上，直至磁珠完全吸附，吸取上清至一新的離心管中，即得轉(zhuǎn)化后的DNA溶液。

注意事項(xiàng)

1. 操作之前，請(qǐng)務(wù)必認(rèn)真閱讀本產(chǎn)品說明書。

2. 磁珠易沉淀，使用前應(yīng)搖勻或渦旋均勻。

3. Buffer DB處理時(shí)間不能過長(zhǎng)，容易造成DNA過度碎片化，影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

4. 磁珠洗脫前應(yīng)徹底去除乙醇，避免殘留乙醇影響DNA洗脫效率和下游實(shí)驗(yàn)。

5. 請(qǐng)勿長(zhǎng)時(shí)間干燥磁珠，以免引起不可逆的磁珠聚集。

6. 回收后的DNA請(qǐng)于-20℃保存，避免反復(fù)凍融。

7. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。