国产精品亚洲片在线va_日本香蕉视频ww_午夜大胆性人体_亚洲中文字幕网

      本試劑盒利用超順性磁珠可逆的結(jié)合核酸的特性以及特有的緩沖體系，可快速、高效的從100 mL過夜培養(yǎng)的菌液中獲得600-1500 μg高純度質(zhì)粒DNA，使用本試劑盒提取的質(zhì)粒DNA可用于酶切反應(yīng)、連接反應(yīng)、PCR擴(kuò)增、測序等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

儲(chǔ)存與運(yùn)輸

      RNase A冰袋（wet ice）運(yùn)輸，-20℃保存；其他試劑室溫運(yùn)輸，室溫儲(chǔ)存；有效期12個(gè)月。

使用前準(zhǔn)備

1. 自備磁力架。

2. 使用前先將試劑盒中提供的RNase A全部加入Buffer SP1中，可于4℃保存6個(gè)月。

3. SP2使用后，應(yīng)立即蓋緊蓋子，避免試劑長時(shí)間與空氣接觸。

4. SP3使用前請于4℃預(yù)冷。

5. 使用前請向Buffer PW中加入77 mL的無水乙醇。

實(shí)驗(yàn)步驟

1. 取100 mL過夜培養(yǎng)菌液（對于低拷貝質(zhì)粒建議取200 mL過夜培養(yǎng)菌液），10,000 rpm（~11,500×g）室溫離心3 min收集菌體于50 mL離心管中（盡量將上清全部去除）；

2. 加入8 mL SP1（請先檢查是否加入RNase A）使用移液器或渦旋振蕩器徹底懸浮菌體（務(wù)必使菌體徹底分散，否則會(huì)影響裂解，導(dǎo)致提取質(zhì)粒的質(zhì)量和純度偏低）；

3. 加入8 mL SP2立即溫和的上下顛倒8-10次使菌體充分裂解（此步不可劇烈震蕩，并且應(yīng)保證在5 min以內(nèi)完成），此時(shí)溶液應(yīng)變得清亮粘稠，如果未變得清亮可能是菌體過多，再重新顛倒幾次直到溶液透明；

4. 加入8 mL SP3（提前4℃預(yù)冷）立即溫和的上下顛倒10-12次，溶液出現(xiàn)緊實(shí)凝集塊，冰上放置5 min，10,000 rpm 4℃離心20 min，取上清于一Nuclease-free的50 mL離心管（客戶自備）中；

5. 加入10 mL SPD，15 mL無水乙醇上下顛倒混勻，隨后再加入600 μL SweMag Beads（用之前渦旋至磁珠分散均勻）上下顛倒至磁珠分散均勻，室溫放置30 min，期間每隔3-5 min顛倒混勻一次；

6. 將50 mL 離心管置于磁力架上靜置2 min后，將離心管隨磁力架溫和地上下顛倒數(shù)次，使殘留在管蓋上的磁珠沖洗下去，繼續(xù)靜置，直到液體澄清，棄掉液體；

7. 將離心管從磁力架上取下，加入5 mL SPW（檢查是否加入無水乙醇），輕輕上下顛倒，使磁珠分散均勻，再將離心管置于磁力架上，將離心管隨磁力架溫和地上下顛倒數(shù)次，使殘留在管蓋上的磁珠沖洗下去，繼續(xù)靜置，直到液體澄清，棄掉液體；

8. 重復(fù)第7步；

9. 將離心管蓋打開，室溫放置5–10 min或65℃放置3–5 min，使乙醇完全揮發(fā)（避免磁珠過度干燥，以免影響核酸得率）；

10. 移去磁力架，加入1-3 mL buffer TE或Nuclease-free Water，用移液器輕輕吹打至磁珠分散均勻，室溫放置3-5 min；

11. 將離心管重新放置于磁力架上，待磁珠完全吸附，取上清于一Nuclease-free的離心管中，即得到高濃度與高純度質(zhì)粒DNA；

12. 得到的質(zhì)粒DNA于-20℃保存?zhèn)溆谩?

注意事項(xiàng)

1. 操作之前，請務(wù)必認(rèn)真閱讀本產(chǎn)品說明書。

2. 磁珠懸液在保存過程中應(yīng)避免冷凍。

3. 磁珠易沉淀，使用前應(yīng)搖勻或渦旋混勻。

4. 洗脫質(zhì)粒前應(yīng)使乙醇完全揮發(fā)，避免殘留的乙醇影響下游實(shí)驗(yàn)。

5. 請勿長時(shí)間干燥磁珠，以免影響DNA洗脫效率。

6. 質(zhì)粒DNA若要長期保存，建議用Buffer TE洗脫。

7. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。