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      本試劑盒采用獨(dú)特的脫蠟試劑，能夠高效去除石蠟包埋組織周圍的蠟塊，避免使用二甲苯等有毒試劑，通過特別優(yōu)化的裂解緩沖液有效地釋放組織中的基因組DNA，以及利用超順性磁珠特異結(jié)合基因組DNA的特性，能夠快速、有效地提取組織中的基因組DNA。獲得的基因組DNA收量大、純度高，適用于PCR、Real-Time PCR、SNP基因分型等多種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

儲(chǔ)存與運(yùn)輸

      RNase A和Proteinase K冰袋（wet ice）運(yùn)輸，-20℃保存；其它試劑室溫運(yùn)輸及儲(chǔ)存；有效期12個(gè)月。

使用前準(zhǔn)備

1. 提前準(zhǔn)備80℃、56℃和90℃的水浴或金屬浴。

2. 如果Buffer GL和Buffer GB出現(xiàn)沉淀，請(qǐng)于65℃加熱溶解，待恢復(fù)至室溫后使用。

3. 使用前請(qǐng)向Buffer GP加入21 mL無水乙醇，向Buffer PW中加入56 mL的無水乙醇，混合均勻后使用。

4. 自備磁力架，異丙醇。

操作步驟

1. 樣本處理

I. 石蠟切片：取石蠟切片（1×1 cm2大小）5-8張，用滅菌手術(shù)刀刮取并收集組織碎片，置于1.5 mL離心管中。

II. 石蠟包埋的組織塊：用滅菌手術(shù)刀刮取約30 mg組織樣本，盡量去除多余的石蠟并切碎樣本，置于1.5 mL離心管中。

III. 福爾馬林浸泡的組織：用濾紙吸干組織表面的液體，取約30 mg樣本切碎并置于1.5 mL離心管中，加入500 μL PBS緩沖液（pH7.4），渦旋振蕩10 s后12,000 rpm室溫離心1 min，棄上清，重復(fù)3次。

2. 向裝有樣本的1.5 mL離心管中加入500 μL Buffer DP，80℃孵育3 min，趁熱渦旋振蕩10 s；

3. 向離心管中加入200 μL Buffer GL，渦旋振蕩混勻，12,000 rpm室溫離心1 min，溶液形成上下兩層（上層為油相，下層為水相）；

4. 于下層水相中加入20 μL Proteinase K和10 μL RNase A，使用移液器輕輕吹打混勻（盡量不要破壞分層），56℃孵育20 min；

5. 隨后將離心管轉(zhuǎn)移至90℃孵育10 min（若未消化完全的組織塊較多，可適當(dāng)延長(zhǎng)孵育時(shí)間至20 min），冷卻至室溫；

6. 向上一步的樣本中加入200 μL Buffer GB和200 μL異丙醇，渦旋振蕩混勻；

7. 12,000 rpm室溫離心1 min，溶液形成上下兩層（上層為油相，下層為水相）；

8. 取下層水相溶液至一新的1.5 mL離心管中（不要取到上層油相溶液和其他雜質(zhì)），向離心管中加入30 μL SweMag Beads（SweMag Beads使用前需渦旋至分散均勻），使用移液器吹打至磁珠分散均勻；

9. 室溫放置5 min，期間使用移液器吹打混勻2-3次，使磁珠保持分散均勻的狀態(tài)；

10. 將離心管移至磁力架上靜置30 s，使磁珠吸附至管壁，待上清清澈后，吸棄上清（為避免影響提取效率，勿將磁珠吸出）；

11. 將離心管從磁力架上取下，向離心管中加入500 μL Buffer GP，使用移液器吹打至磁珠分散均勻，再將離心管移至磁力架上靜置30 s，使磁珠吸附到管壁，待上清清澈后，吸棄上清（為避免影響提取效率，勿將磁珠吸出）；

12. 將離心管從磁力架上取下，向離心管中加入600 μL Buffer PW，用移液器吹打至磁珠分散均勻，再將離心管移至磁力架上靜置30 s，使磁珠吸附到管壁，待上清清澈后，吸棄上清（為避免影響提取效率，勿將磁珠吸出）；

13. 重復(fù)操作步驟12；

14. 將離心管蓋打開，室溫放置5–10 min或65℃放置3–5 min，使乙醇完全揮發(fā)（請(qǐng)勿使磁珠過度干燥，以免影響核酸得率）；

15. 將離心管從磁力架上取下，向離心管中加入50-100 μL Buffer TE或無酶水，用移液器輕輕吹打至磁珠分散均勻，室溫靜置3 min；

16. 將離心管置于磁力架上，直至磁珠完全吸附，吸取上清至一新的離心管中，即得高純度的基因組DNA。

注意事項(xiàng)

1. 操作之前，請(qǐng)務(wù)必認(rèn)真閱讀本產(chǎn)品說明書。

2. 本試劑盒提取DNA的得率和完整性依賴于樣本種類，固定時(shí)間、固定條件以及樣本儲(chǔ)存時(shí)間等。固定時(shí)間最好在8-24 h以內(nèi)，如果樣本固定時(shí)間超過24小時(shí)或者存放時(shí)間超過1年，則會(huì)導(dǎo)致DNA碎片化過多，而無法擴(kuò)增出目的條帶。

3. 樣本包埋前需完全脫水，以防止殘留的福爾馬林對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)造成影響。

4. 包埋組織取樣時(shí)應(yīng)盡量去除多余的石蠟并切碎樣本，且取樣量不要超過30 mg，否則易造成裂解不充分的情況，影響核酸得率。

5. 磁珠易沉淀，使用前應(yīng)搖勻或渦旋混勻，磁珠懸液在保存過程中應(yīng)避免冷凍。

6. 洗脫基因組DNA前應(yīng)使乙醇完全揮發(fā)，避免殘留的乙醇影響下游實(shí)驗(yàn)，但請(qǐng)勿長(zhǎng)時(shí)間干燥磁珠，以免影響基因組DNA洗脫效率。

7. 提取的基因組DNA作為PCR擴(kuò)增模板時(shí)，建議先做模板濃度梯度測(cè)試，選擇最佳模板濃度進(jìn)行擴(kuò)增。

8. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。