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      本試劑盒通過獨(dú)特包埋的磁珠與堿裂解相結(jié)合的方法選擇性地吸附質(zhì)粒DNA，可從1–5 mL過夜培養(yǎng)的菌液中提取多至20 μg的高純度質(zhì)粒DNA，適用于后續(xù)的PCR擴(kuò)增、測(cè)序、體外轉(zhuǎn)錄、酶切反應(yīng)、轉(zhuǎn)化等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

儲(chǔ)存與運(yùn)輸

      RNase A冰袋（wet ice）運(yùn)輸，-20℃保存；其余試劑常溫運(yùn)輸，常溫儲(chǔ)存；有效期12個(gè)月。

使用前準(zhǔn)備

1. 使用前先將試劑盒中提供的RNase A全部加入Solution I中，并于4℃保存。

2. Solution II如有沉淀現(xiàn)象，請(qǐng)于65℃加熱，直至沉淀消失，混勻即可使用（Solution II不宜在空氣中暴露太久）。

3. Binding Buffer和SPW Buffer使用前加入指定量（見瓶身）的無水乙醇。

4. 自備磁力架和1.5 mL滅菌的離心管。

操作步驟

1. 取1-5 mL過夜培養(yǎng)的新鮮菌液，12,000 rpm離心1 min，收集于1.5 mL離心管中，吸棄上清；

2. 加入150 μL已混有RNase A的Solution I，使用移液器或渦旋儀徹底分散菌體；

3. 加入150 μL Solution II，溫和地上下顛倒8-10次使菌體充分裂解，形成透明溶液（此步驟不宜超過5 min）；

4. 加入150 μL的4℃預(yù)冷的Neutralization Buffer，立即溫和上下顛倒8–10次充分混勻（此時(shí)會(huì)出現(xiàn)白色沉淀），12,000 rpm離心10 min；

5. 小心吸取上清轉(zhuǎn)移至新的1.5 mL滅菌的離心管中，加入450 μL Binding Buffer，上下顛倒混勻，再加入30 μL SweMag Beads（SweMag Beads使用前需渦旋至分散均勻），溫和上下顛倒數(shù)次，至磁珠分散均勻；

6. 室溫放置5 min，期間使用移液器或渦旋儀混勻2-3次，至磁珠分散均勻；

7. 將離心管移至磁力架上靜置30 s，直至磁珠完全吸附，將離心管隨磁力架溫和地上下顛倒數(shù)次，使管壁殘留的磁珠沖刷下來，待上清清澈后，吸棄上清（為避免影響提取效率，勿將磁珠吸出）；

8. 加入300 μL Buffer SPW，移開磁力架，用移液器輕輕吹打至磁珠分散均勻；將離心管移至磁力架上靜置30 s，再將離心管隨磁力架溫和地上下顛倒數(shù)次，使管壁殘留的磁珠與鹽分沖刷下來，待上清清澈后，吸棄上清（為避免影響提取效率，請(qǐng)務(wù)必吸盡離心管內(nèi)殘留的液體）；

9. 重復(fù)操作步驟8；

10. 將離心管蓋打開，室溫放置5–10 min或65℃放置3–5 min，使乙醇完全揮發(fā)（避免磁珠過度干燥，以免影響核酸得率）；

11. 移去磁力架，加入50–80 μL Buffer TE或Nuclease-free Water，用移液器輕輕吹打至磁珠分散均勻，室溫靜置3 min；

12. 將離心管置于磁力架上，直至磁珠完全吸附，吸取上清至一新的離心管中，即得高純度的質(zhì)粒DNA。

注意事項(xiàng)

1. 操作之前，請(qǐng)務(wù)必認(rèn)真閱讀本產(chǎn)品說明書。

2. 磁珠懸液在保存過程中應(yīng)避免冷凍。

3. 磁珠易沉淀，使用前應(yīng)搖勻或渦旋混勻。

4. 加入磁珠前，需要將其他試劑混合均勻。

5. 洗脫質(zhì)粒DNA前應(yīng)使乙醇完全揮發(fā)，避免殘留的乙醇影響下游實(shí)驗(yàn)。

6. 請(qǐng)勿長(zhǎng)時(shí)間干燥磁珠，以免影響質(zhì)粒DNA洗脫效率。

7. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。