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      本試劑盒采用特殊的裂解緩沖體系與硅膠膜結(jié)合的純化方式，能夠快速地從小于100 mg的植物組織中提取總RNA，并有效的去除植物組織中的多糖、多酚、多脂等雜質(zhì)，無需苯酚、氯仿等有機(jī)試劑。提取的高純度RNA，可直接用于RT-PCR、RT-qPCR、Northern雜交、cDNA文庫構(gòu)建、微陣列分析等各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

儲(chǔ)存與運(yùn)輸

      DNase冰袋（wet ice）運(yùn)輸，-20℃保存；其余試劑常溫運(yùn)輸，常溫儲(chǔ)存；有效期12個(gè)月。

使用前須知（請(qǐng)仔細(xì)閱讀）

1. 采集的樣本應(yīng)立刻提取RNA或于-80℃保存，否則會(huì)導(dǎo)致提取的RNA的產(chǎn)量與質(zhì)量下降。

2. Buffer PRL如有沉淀現(xiàn)象，請(qǐng)于37℃加熱溶解，待恢復(fù)至室溫后使用。

3. 使用前請(qǐng)?jiān)贐uffer PRL中加入β-巰基乙醇，使終濃度為2%，即1 mL的Buffer PRL中加入20 μL的β-巰基乙醇。此裂解液最好現(xiàn)配現(xiàn)用，加入β-巰基乙醇后室溫可放置1個(gè)月。

4. 使用前請(qǐng)向Buffer RW1和Buffer RW2中加入指定量（見瓶身）的無水乙醇。

5. 使用研磨儀研磨組織時(shí)，將研磨儀提前預(yù)冷。

操作步驟

1. 植物組織樣本裂解：

a. （推薦）取新鮮或超低溫凍存的植物組織50-100 mg，迅速轉(zhuǎn)移到裝有2-3顆3 mm的研磨珠（推薦ABC0221-150G）并用液氮預(yù)冷的2.0 mL RNase-free研磨管（推薦ABC-200-M）中，將研磨管置于研磨儀（推薦ABC901001）上（放置研磨管前將適配器于液氮中迅速預(yù)冷）進(jìn)行研磨，直至研磨成粉末狀（如果樣本沒有完全研磨成粉末狀，會(huì)影響RNA的收率和質(zhì)量）。然后加入500 μL Buffer PRL，使用移液器吹打至樣本與Buffer PRL充分混合，室溫放置5 min。

b. 取新鮮或超低溫凍存的植物組織50-100 mg，迅速轉(zhuǎn)移到用液氮預(yù)冷的1.5 mL RNase-free離心管中，加入液氮，用研杵研磨組織，其間不斷加入液氮，直至研磨成粉末狀（如果樣本沒有完全研磨成粉末狀，會(huì)影響RNA的收率和質(zhì)量）。然后加入500 μL Buffer PRL，使用移液器吹打至樣本與Buffer PRL充分混合，室溫放置5 min。

c. 取新鮮或超低溫凍存的植物組織50-100 mg，迅速轉(zhuǎn)移到用液氮預(yù)冷的研缽中，加入液氮，用研杵研磨組織，其間不斷加入液氮，直至研磨成粉末狀（如果樣本沒有完全研磨成粉末狀，會(huì)影響RNA的收率和質(zhì)量）。然后將研磨成粉末的樣本加入到含有500 μL Buffer PRL的1.5 mL RNase-free離心管中，使用移液器吹打至樣本與Buffer PRL充分混合，室溫放置5 min。

2. 12,000 rpm，4℃離心5 min，將上清液轉(zhuǎn)移至一新的RNase-free離心管中，盡量不要吸取沉淀；

3. 向離心管中加入與上清液等體積的無水乙醇，上下顛倒混勻；

4. 將上述混合液轉(zhuǎn)移至RNA Spin Column（含Collection Tube）中，每次加入量不超過600 μL，如果超過600 μL可分批加入；

5. 12,000 rpm離心30 s，棄掉濾液。將RNA Spin Column重新放回Collection Tube中；

6. 向RNA Spin Column中加入500 μL Buffer RW1，12,000 rpm離心30 s，棄掉廢液；

7. 向RNA Spin Column中加入600 μL Buffer RW2（請(qǐng)沿RNA Spin Column管壁加入Buffer RW2，有助于沖洗管壁上殘留的鹽分），12,000 rpm離心30 s，棄掉廢液；

8. DNase反應(yīng)液配制：取5 μL 10×DNase Buffer，5 μL DNase，40 μL RNase-free Water于一新的RNase-free的1.5 mL RNase-Free離心管中混勻；

9. 向RNA Spin Column中央加入50 μL DNase反應(yīng)液，室溫靜置15 min；

10. 向RNA Spin Column中加入500 μL Buffer RW2，12,000 rpm離心30 s，棄掉廢液；

11. 重復(fù)操作步驟10；

12. 將RNA Spin Column放入Collection Tube中，12,000 rpm離心2 min；

13. 將RNA Spin Column置于一新的RNase-Free的1.5 mL的離心管中，室溫放置3-5 min，使RNA Spin Column殘留的乙醇完全揮發(fā)；

14. 向RNA Spin Column的膜中央加入50-100 μL RNase-free Water，室溫放置5 min，12,000 rpm離心2 min，收集RNA。若要得到更高濃度的RNA，也可以將第一次的洗脫液重新加回至RNA Spin Column中，室溫靜置5 min，12,000 rpm離心2 min，再次收集RNA。

注意事項(xiàng)

1. 操作時(shí)請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服，并佩戴一次性手套。

2. 應(yīng)使用無RNase的塑料制品和槍頭，避免交叉污染。

3. 應(yīng)使用RNA操作專用實(shí)驗(yàn)臺(tái)與電泳設(shè)備，并且在操作過程中佩戴口罩，防止所用器皿與試劑受到RNase的污染。

4. 如果在實(shí)驗(yàn)室以外的地方采集植物樣本，需將樣本置于攜帶的液氮或干冰中，避免影響提取的RNA的得率與質(zhì)量。

附表：

本試劑盒對(duì)多種植物樣本的RNA提取量見下表，RNA的提取量和植物的種類、部位、新鮮程度以及生長(zhǎng)狀態(tài)有關(guān)，下表僅供參考。