国产精品亚洲片在线va_日本香蕉视频ww_午夜大胆性人体_亚洲中文字幕网

      本試劑盒適用于革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌的RNA提取，采用獨(dú)特的裂解緩沖系統(tǒng)，結(jié)合硅膠柱純化技術(shù)可快速有效地提取細(xì)菌的RNA，提取過程可在30-40 min內(nèi)完成，RNA得率大，純度高，適用于RT-PCR、Real-Time PCR、芯片分析、Northern Blot、Dot Blot、PolyA篩選、體外翻譯、RNase保護(hù)分析和分子克隆等多種下游分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

儲(chǔ)存與運(yùn)輸

      Lysozyme（50 mg/mL）、DTT solution和DNase冰袋（wet ice）運(yùn)輸，-20℃保存；其它試劑室溫運(yùn)輸，室溫儲(chǔ)存，有效期12個(gè)月。

使用前準(zhǔn)備

1. 請(qǐng)自備10 mM Tris-HCl（pH 8.0），用于重懸收集的細(xì)菌菌體。

2. 若提取革蘭氏陽性菌RNA，請(qǐng)?zhí)崆皽?zhǔn)備37℃的水浴或加熱塊。

3. 若Buffer BRL出現(xiàn)沉淀，請(qǐng)于37℃加熱溶解，待恢復(fù)至室溫后使用。

4. 請(qǐng)?jiān)谑褂们跋駼uffer BRL加入DTT Solution至4%，即每1 mL Buffer BRL加40 μL DTT Solution，最好現(xiàn)用現(xiàn)配，加入DTT Solution的Buffer BRL可于4℃保存1周。

5. DNase工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。

6. 使用前請(qǐng)向Buffer RW2中加入64 mL的無水乙醇，混合均勻后使用。

操作步驟

1. 取1-3 mL菌液（細(xì)菌總量不超過109），12,000 rpm（~13,400×g）4℃離心2 min收集菌體；

      注：上清請(qǐng)務(wù)必去除干凈，否則可能影響細(xì)菌細(xì)胞壁的酶解消化過程。

      注：菌體不宜過量，否則可能會(huì)造成產(chǎn)量降低、基因組殘留以及蛋白污染等問題，OD600=1時(shí)建議取1 mL的菌液量。

2. 將菌體重懸于100 μL含溶菌酶的10 mM Tris-HCl中，溶菌酶濃度及孵育條件見下表：

3. 向孵育后的懸液中加入350 μL Buffer BRL（使用前請(qǐng)確認(rèn)已加入DTT solution），渦旋振蕩混勻；

4. 加入250 μL無水乙醇，使用移液器吹打混勻（可能會(huì)出現(xiàn)沉淀），將混合液和沉淀全部轉(zhuǎn)入RNA Spin Column中，12,000 rpm（~13,400×g）室溫離心1 min，棄濾液；

5. 向RNA Spin Column中加入350 μL Buffer RW1，12,000 rpm（~13,400×g）室溫離心1 min，棄濾液；

6. 配制DNase工作液：取40 μL Nuclease-free Water、5 μL 10×DNase Reaction Buffer和5 μL DNase置于一新的Nuclease-free離心管中，使用移液器輕輕吹打混勻；

7. 將DNase工作液懸空滴加到RNA Spin Column的膜中央，室溫靜置15 min；

8. 向RNA Spin Column中加入350 μL Buffer RW1，12,000 rpm（~13,400×g）室溫離心1 min，棄濾液；

9. 向RNA Spin Column中加入600 μL Buffer RW2（請(qǐng)沿管壁加入Buffer RW2，有助于沖洗管壁上殘留的鹽分），12,000 rpm（~13,400×g）室溫離心1 min，棄濾液；

10. 重復(fù)步驟9；

11. 將RNA Spin Column重新置于收集管上，12,000 rpm（~13,400×g）室溫離心2 min，取出RNA Spin Column置于新的Nuclease-free的1.5 mL離心管上；

12. 將RNA Spin Column開蓋室溫放置3-5 min，盡量使殘留的乙醇揮發(fā)完全；

13. 向RNA Spin Column的膜中央懸空加入50-100 μL Nuclease-free Water，室溫靜置2 min，12,000 rpm（~13,400×g）室溫離心2 min，收集RNA溶液。若要得到更高濃度的RNA，也可以將第一次的洗脫液重新加回至RNA Spin Column中，室溫靜置2min，12,000 rpm（~13,400×g）室溫離心2 min，再次洗脫RNA；

14. 得到的RNA溶液請(qǐng)于-80℃保存。

注意事項(xiàng)

1. 操作之前，請(qǐng)務(wù)必認(rèn)真閱讀本產(chǎn)品說明書。

2. 實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)穿實(shí)驗(yàn)服，戴一次性手套，佩戴口罩，避免講話，提取RNA過程中所使用的器具和配制溶液所用的水或試劑請(qǐng)確保為Nuclease-free的制品。

3. 提取完成的RNA在繼續(xù)處理過程中應(yīng)使用Nuclease-free的玻璃或塑料器皿。玻璃器皿可在150℃烘箱內(nèi)烘烤4 h，塑料器皿可在0.5 M NaOH溶液中浸泡10 min，然后用水清洗干凈，再121℃滅菌30 min，即可去除RNase。

4. 不同細(xì)菌細(xì)胞壁的酶解難易程度不同，革蘭氏陽性菌細(xì)胞壁一般較難酶解，客戶可根據(jù)細(xì)菌種類適當(dāng)摸索溶菌酶濃度和孵育時(shí)間。

5. 部分試劑易揮發(fā)或氧化，應(yīng)避免試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中，各試劑使用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子。

6. 應(yīng)使用RNA提取專用操作實(shí)驗(yàn)臺(tái)與電泳設(shè)備。