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      本試劑盒設(shè)計用于快速、便捷的從血清、血漿、尿液、細胞培養(yǎng)液上清、病毒原液及感染病毒的組織中分離各種病毒DNA/RNA。本產(chǎn)品通過利用核酸吸附柱可逆的結(jié)合核酸的特性，再搭配專門的緩沖體系，允許核酸特異的與膜基質(zhì)結(jié)合，蛋白、細胞碎片以及其他污染物被有效漂洗，最終用Nuclease-free Water將核酸從吸附柱上洗脫下來。得到的高質(zhì)量的DNA/RNA可直接進行下游PCR、cDNA合成、RT-qPCR等分子生物學(xué)實驗。

儲存與運輸

      Proteinase K和Carrier RNA冰袋（wet ice）運輸，-20℃保存；其余試劑室溫運輸，室溫儲存；有效期12個月。

使用前準(zhǔn)備

1. Buffer VLB和Buffer VWA如有沉淀現(xiàn)象，請于37℃加熱溶解，待恢復(fù)室溫后適用。

2. 首次使用前請向Buffer VWA中加入18 mL的無水乙醇，Buffer VWB中加入60 mL的無水乙醇。

3. 首次使用前可先將Carrier RNA分裝后于-20℃保存，應(yīng)避免反復(fù)凍融。

4. 使用組織研磨儀時，提前將研磨儀預(yù)冷。

實驗步驟

1. 病毒樣本的處理：

      a) 血清、血漿、尿液、細胞培養(yǎng)液上清和病毒原液的裂解：取10-200 μL的血清、血漿、尿液、細胞培養(yǎng)液上清或病毒原液，起始量不足200 μL可用PBS或Nuclease-free Water補至200 μL。

      b)感染病毒的組織裂解：取10-20 mg新鮮或超低溫凍存的感染病毒的組織，置于裝有2-3顆3 mm研磨珠（推薦ABC0221）的1.5 mLNuclease-free離心管或?qū)Ｓ醚心ス埽ㄍ扑]ABC-200-M）中，立刻將裝有組織的離心管或研磨管置于液氮中，隨后使用組織研磨儀（推薦ABC901001）在低溫條件下將組織徹底研磨至勻漿狀（如果組織沒有被徹底勻漿，將會影響DNA/RNA的得率和質(zhì)量），研磨后加入200 μL的PBS或Nuclease-free Water。

2. 加入200 μL Buffer VLB，20 μL Proteinase K和3 μL Carrier RNA，充分混勻后于56℃孵育10 min;

3. 加入200 μL無水乙醇，上下顛倒混勻；

4. 將上一步的溶液轉(zhuǎn)移至Spin Column中，12,000 rpm 離心1 min，棄掉Collection tube中濾液；

5. 向Spin Column中加入500 μL的Buffer VWA，12,000 rpm離心1 min，棄掉Collection tube中的濾液；

6. 向Spin Column中加入700 μL Buffer VWB（請沿Spin Column管壁加入Buffer VWB，有助于沖洗管壁上殘留的鹽分），12,000 rpm離心30 s，棄掉廢液；

7. 重復(fù)操作步驟6;

8. 將Spin Column置于Collection tube上，12,000 rpm離心2 min；

9. 將Spin Column轉(zhuǎn)移至新的Nuclease-free 1.5 mL離心管中，開蓋室溫靜置3-5 min，使Spin Column殘留的乙醇完全揮發(fā)；

10. 向Spin Column中央加入30-50 μL的Nuclease-free Water，室溫靜置5 min，12,000 rpm，室溫離心2 min洗脫DNA/RNA。若要得到更高濃度的DNA/RNA，也可以將第一次的洗脫液重新加回至Spin Column中，室溫靜置5min，12,000 rpm，室溫離心2 min，再次收集DNA/RNA。

注意事項

1. 操作之前，請務(wù)必認真閱讀本產(chǎn)品說明書。

2. 由于提取過程中加入了Carrier RNA，不能通過電泳或吸光度計測定定量。

3. 本試劑盒提供的Carrier RNA是大腸桿菌來源的RNA，主要是為了提高微量核酸的回收效率與防止得到的微量RNA被降解，如果PCR擴增引物與Carrier RNA具有較高同源性時，可重新設(shè)計引物。

4. 洗脫前，應(yīng)使乙醇完全揮發(fā)，避免殘留的乙醇影響下游實驗。

5. 請勿長時間干燥，以免影響核酸洗脫效率。

6. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。